非霍奇金淋巴瘤中ZO-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、研究背景及目的：DNA甲基化是腫瘤早期頻發(fā)事件，高甲基化可導(dǎo)致基因沉默，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。非霍奇金淋巴瘤（NHL）是血液系統(tǒng)惡性腫瘤，目前臨床治療已進(jìn)入分子靶向治療水平，但對(duì)于分期評(píng)價(jià)、預(yù)后監(jiān)測(cè)卻仍停留在影像學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)水平，與治療相比較為滯后。于力教授等用RLGS方法篩查出ZO-1基因可能與血液系統(tǒng)惡性疾病相關(guān)，它的啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化起到重要作用。ZO-1是一種緊密連接蛋白，它在維持正常胞旁屏障通透性、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄

2、及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化中發(fā)揮著巨大作用，與腫瘤的分化和浸潤(rùn)密切相關(guān)。前期研究證實(shí)其在人白血病細(xì)胞系HL60中、自然殺傷細(xì)胞系NK92中呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)且失表達(dá)，這提示它可能是一個(gè)血液系統(tǒng)惡性腫瘤相關(guān)的抑癌基因。本文旨在通過(guò)研究ZO-1基因在非霍奇金淋巴瘤石蠟標(biāo)本、骨髓標(biāo)本中甲基化狀態(tài)及其與分期、分型、緩解間關(guān)系，進(jìn)一步探討其作為通用性基因標(biāo)記、指導(dǎo)臨床治療的意義。
　　 實(shí)驗(yàn)共分兩部分。
　　 第一部分：
　　 方法

3、：采用甲基化特異性PCR（MS-PCR）方法對(duì)29例非霍奇金淋巴瘤及10例反應(yīng)性增生淋巴結(jié)石蠟包埋標(biāo)本ZO-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：（1）29例NHL中17例出現(xiàn)甲基化條帶，2例出現(xiàn)完全非甲基化條帶，10例未出現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物，甲基化陽(yáng)性率89.4％（17/19），陽(yáng)性率明顯高于反應(yīng)性增生淋巴結(jié)（0/7）（p<0.05）。（2）4例T細(xì)胞型NHL，甲基化陽(yáng)性4例，陽(yáng)性率100％，15例B細(xì)胞型NHL，甲基化陽(yáng)性13例，陽(yáng)性率8

4、6.6％，二者差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。T細(xì)胞型、B細(xì)胞型NHL分別與反應(yīng)性增生淋巴結(jié)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（3）共檢測(cè)標(biāo)本39例，其中2年以上標(biāo)本16例，獲得檢測(cè)結(jié)果的7例，檢出率43.7％；1-2年標(biāo)本7例，獲得檢測(cè)結(jié)果3例，檢出率42.9％；1年以下標(biāo)本16例，全部獲得檢測(cè)結(jié)果，2年以上標(biāo)本與1-2年間標(biāo)本間檢出率無(wú)顯著差別（P>0.05），上述兩組標(biāo)本與1年以?xún)?nèi)標(biāo)本檢出率比較均有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：1、ZO-1

5、基因甲基化在NHL組織中發(fā)生率顯著增高，在各亞型間差別不大，可以作為NHL輔助診斷的通用性基因標(biāo)記；2、隨著標(biāo)本制備時(shí)間延長(zhǎng)檢出率下降，使用較為新鮮的組織，可增加檢測(cè)的敏感性、降低假陰性率。
　　 第二部分
　　 方法：采用MS-PCR方法對(duì)45例次NHL骨髓、5例特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）、5例正常人骨髓標(biāo)本ZO-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：（1）骨髓ZO-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況：39例初治或復(fù)發(fā)或

6、未達(dá)到完全緩解的NHL患者中ZO-1基因甲基化陽(yáng)性21例（陽(yáng)性率53.85％），而ITP組及正常人組甲基化陽(yáng)性率均為0％（0/5），NHL患者與ITP及正常人間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；（2）NHL初治、復(fù)發(fā)組甲基化陽(yáng)性率57.14％（16/28），未完全緩解組甲基化陽(yáng)性率45.45％（5/11），分別與CR組0％（0/6）比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），而初治、復(fù)發(fā)組與未完全緩解組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（3）T、B細(xì)胞型NHL間甲基化

7、狀況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），而B(niǎo)細(xì)胞各亞型以濾泡型淋巴細(xì)胞甲基化陽(yáng)性率高，其次為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤、邊緣帶淋巴瘤，最后是套細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤。（4）在39例初治或復(fù)發(fā)或未達(dá)到完全緩解的NHL患者中，28例Ⅲ、Ⅳ期的患者ZO-1基因甲基化陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率64.29％，11例Ⅰ、Ⅱ期患者ZO-1基因甲基化陽(yáng)性3例，陽(yáng)性率27.27％，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。（5）動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)部分患者甲基化與治療效果關(guān)系顯