白念珠菌鐵與鈣代謝途徑相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、白念珠菌是念珠菌病原體中最常見的條件性致病菌，從宿主中獲得鐵的能力對(duì)于其的定居和存活是必需的。在釀酒酵母中主要靠Aftlp來(lái)調(diào)節(jié)鐵代謝基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，白念珠菌中也有著與其具有一定同源性的Aft2p，也對(duì)白念珠菌鐵代謝基因有一定的影響。同時(shí)，白念珠菌細(xì)胞外的pH條件影響著鐵離子的生物可利用率，大部分鐵代謝基因都在不同pH時(shí)表達(dá)量不同，因此推測(cè)鐵獲得系統(tǒng)也受由外界pH影響的轉(zhuǎn)錄因子Rim101p調(diào)控。
　　 為了研究Rim10

2、1p及Aft2p與鐵代謝基因FRE2的相互作用，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了LacZ報(bào)告基因與高鐵還原酶基因FRE2啟動(dòng)子的融合結(jié)構(gòu)pNKfre2，將其轉(zhuǎn)化野生型和rim101-/-，aft-/-，pir-/-突變型白念珠菌細(xì)胞，測(cè)定在不同培養(yǎng)條件下β-半乳糖苷酶活性，結(jié)果表明：Rim101p能夠正向調(diào)控鐵代謝基因FRE2的表達(dá)，同時(shí)說(shuō)明FRE2的表達(dá)隨堿性pH上調(diào)是由鐵饑餓造成的。
　　 鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin，CaN)是真核

3、生物依賴鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要參與者，在白念珠菌感受環(huán)境刺激、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其毒力方面均起關(guān)鍵作用。而目前，唯一一個(gè)確認(rèn)的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的主要下游因子是CrZlp，但已有實(shí)驗(yàn)證明，僅有部分鈣淵控基因是通過(guò)CRZ1基因被鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶調(diào)控的，鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶還通過(guò)CRZ1基因以外的其它基因來(lái)調(diào)節(jié)下游因子。
　　 本文根據(jù)文獻(xiàn)中基因微列陣實(shí)驗(yàn)報(bào)道，選取在鈣離子依賴的情況下，受鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CNA1)及/或CRZ1基因調(diào)節(jié)表達(dá)上調(diào)的基因TP

4、O4，RTA2，ENA21進(jìn)行基因敲除，比較其缺失突變株在含高濃度的鈣離子，細(xì)胞外高滲脅迫，鋰離子，SDS，及抗真菌藥物的條件下，與野生株，CNA1及CRZ1缺失突變株的生長(zhǎng)狀態(tài)差異。結(jié)果表明：雖然TPO4，RTA2，ENA21在鈣離子依賴的情況下，受CNA1及/或CRZ1基因調(diào)節(jié)表達(dá)上調(diào)，但鈣離子對(duì)它們沒有直接的影響，只通過(guò)CNA1及CRZ1基因?qū)λ鼈冞M(jìn)行調(diào)節(jié)。RTA2在由鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶介導(dǎo)的對(duì)唑類藥物的耐受性中起主要作用，并且這種作