深低溫冷凍對骨肉瘤體外滅活的實驗研究.pdf

1、目的：研究新鮮骨肉瘤組織深低溫冷凍后的腫瘤細胞組織形態(tài)學改變及死亡機制，以探討冷凍殺傷骨肉瘤細胞的有效時間及方式，為臨床開展冷凍外科治療提供依據。 方法： (1)分組：將手術切取下的新鮮骨肉瘤標本即刻分為三組，即A組(對照組，未做任何處理)、B組(冷凍組)和C組(凍融組)。 (2)實驗過程：B組和C組標本各4份，大小一致，分別置于金屬容器中以液氮浸泡5min、10min、15min、20min，并快速復溫；其中C

2、組各標本再復凍5min、10min、15min、20min后再次快速復溫(即兩次凍融)，各組標本固定備用。 (3)采用光鏡、透射電鏡和流式細胞儀觀察并檢測A、B、C組骨肉瘤細胞凍融前后的形態(tài)學變化和變性壞死率、細胞凋亡率。 結果： (1)A組為骨肉瘤組織，光鏡下觀察并分型：其中成骨細胞型5例，成軟骨型3例，成纖維細胞型1例，毛細血管擴張型1例。透射電鏡對其觀察發(fā)現細胞異型性明顯，細胞核常偏位，核膜凹陷，常見不規(guī)則

3、的核仁和假包涵體。胞質豐富，含大量粗面內質網(RER)，并常擴張成多種形態(tài)的囊泡。 (2)B組和C組標本經光鏡下發(fā)現冷凍后冰晶造成空白區(qū)位于腫瘤細胞胞漿內外，可見到細胞變性壞死：細胞膜破裂，細胞內空化，胞漿溶解；同時有部分骨肉瘤細胞體積縮小，呈現凋亡改變：細胞膜完整，胞質致密、嗜酸性染色增強，核固縮、核碎裂并可形成凋亡小體，其常以分散單個形式存在，與周圍細胞分離，不引起炎癥反應。計算B組及C組腫瘤細胞變性壞死率為42％～61％，

4、且B、C各組之間壞死率比較無統(tǒng)計學差異。 (3)B組和C組標本經透射電鏡對其超微結構觀察發(fā)現冷凍區(qū)骨肉瘤細胞以壞死為主，表現為細胞膜溶解消失，粗面內質網腫脹，核糖體消失；壞死細胞周圍可見腫瘤細胞凋亡的現象，表現為細胞體積縮小，核固縮并現成凋亡小體。與B組比較而言，C組腫瘤細胞的損傷程度進一步加重，甚至出現廣泛性的細胞結構完全崩解消失，殘余部分的細胞輪廓。 (4)流式細胞儀檢測顯示B、C組標本較A組標本凋亡比例顯著升高，B