NMDA受體激活在宮內(nèi)缺氧胎鼠肺發(fā)育受阻中的作用.pdf

1、第一章宮內(nèi)缺氧對胎鼠發(fā)育的影響 目的:建立宮內(nèi)缺氧模型，觀察宮內(nèi)缺氧對胎鼠發(fā)育的影響，重點了解對胎鼠肺發(fā)育的影響。 方法: 1.動物模型的制備及實驗分組通過降低母鼠吸入氧濃度至10.5±1.0％，每天持續(xù)缺氧8小時，建立宮內(nèi)缺氧的模型。實驗分組為：空氣對照組，缺氧2天組，缺氧6天組和缺氧10天組。于孕21天剖宮后對胎鼠進行相關檢查。 2.一般情況相關檢查記錄孕鼠體重、胎鼠體重、胎鼠個數(shù)、存活率、胎心（右心

2、室/左心室+室間隔即RV/LV+S）等。 3.胎盤組織病理學檢查留取空氣對照組及各缺氧對照組胎盤連同臍帶及血管兩例，選擇標準是該組重量最大和最小者，進行病理學相關檢查。 4.肺組織相關檢查所有胎鼠進行肺濕重稱量，取部分胎肺左葉作HE染色、輻射狀肺泡計數(shù)（RAC）、肺小動脈外徑、管壁厚度、管壁厚度/肺小動脈外徑（WT％）、血管總面積、管壁面積、管壁面積/總面積（WA％）檢測。 5.統(tǒng)計學分析試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表

3、示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）及SNK-q檢驗。p<0.05認為有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果: 1.胎鼠存活率隨著缺氧時間的延長動物的存活率降低。 2.胎鼠情況不同缺氧天數(shù)的胎鼠體重明顯低于空氣對照組，隨缺氧天數(shù)增加而進一步降低，右心室/左心室+室間隔（RV/LV+S）均明顯高于空氣對照組，不隨缺氧天數(shù)增加而進一步增加。 3.胎肺情況胎肺重量在宮內(nèi)缺氧2天組即明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天

4、數(shù)的增加進一步降低。肺重/體重的比值在缺氧2天組明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加有增加。 4.胎盤組織HE染色空氣對照組胎盤絨毛結(jié)構(gòu)正常，各缺氧組與對照組無差異，臍動脈各缺氧組與對照組間無差異。 5.胎肺組織HE染色空氣對照組肺泡結(jié)構(gòu)規(guī)則，排列有序，肺泡間隔分布均勻，肺泡腔未見明顯滲出。隨著缺氧天數(shù)增加，肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則，排列紊亂，肺泡間隔分布不均勻，肺泡腔見明顯滲出?？諝鈱φ战M肺小動脈管壁較薄、管腔較大，缺氧10天組肺小動

5、脈管壁增厚、管腔狹窄。 6.輻射狀肺泡計數(shù)（RAC）缺氧2天組即明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加進一步降低。7.肺血管形態(tài)測定隨著宮內(nèi)缺氧時間的延長肺血管形態(tài)變化，缺氧10天組，其管壁面積/總面積（WA％）、管壁厚度（um）、管壁厚度/肺小動脈外徑（WT90）的p<0.01。 結(jié)論: 1.成功建立大鼠宮內(nèi)缺氧模型。 2.宮內(nèi)缺氧，胎鼠發(fā)育受限、胎肺發(fā)育不良：并隨著宮內(nèi)缺氧時間的延長，胎鼠發(fā)育受限進一步加重。

6、 第二章 MK-801對不同宮內(nèi)缺氧所致胎鼠肺發(fā)育受阻的作用 目的:檢測對照組及各缺氧組胎肺組織NMDAR表達情況，并觀察NMDA受體拮抗劑（MK-801）對宮內(nèi)缺氧下胎鼠發(fā)育的作用。 方法: 1.動物模型的制備及實驗分組動物模型同第一章。實驗分組為：空氣對照組，空氣+MK-801組，缺氧對照組，缺氧+MK-801組。 2.胎肺組織NMDARmRNA表達對空氣對照組及各缺氧對照組部分肺組織進行RN

7、A的提取，進行NMDA1及2A、B、C、D受體mRNA的Real Time-PCR測定（由上海閃晶公司完成）。 3.一般情況相關檢查同第一章。 4.胎盤組織病理學檢查同第一章。 5.肺組織相關檢查同第一章。 6.統(tǒng)計學分析試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）及SNK-q檢驗。p<0.05認為有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果: 1.胎肺組織NMDAR表達

8、空氣對照組，胎鼠肺組織以NMDAR2D表達為主；隨著宮內(nèi)缺氧時間的延長，胎肺組織各NMDAR表達均增高，于缺氧6天表達最高，其中NMDAR2D表達最顯著；在缺氧10天，肺組織各NMDAR表達與空氣對照組比較無差異。 2.胎鼠存活率MK-801可明顯地提高各缺氧組的存活率。 3.胎鼠情況加入MK-801，減輕了缺氧所致胎鼠體重下降。各空氣+MK-801組與空氣對照組比較，胎鼠體重要輕于后者。加入MK-801，減輕了缺氧所致

9、RV/LV+S（％）下降。各空氣+MK-801組與空氣對照組比較，RV/LV+S（％）要大于后者。 4.胎肺組織HE染色各缺氧+MK-801組較缺氧組肺泡數(shù)量增加，肺泡結(jié)構(gòu)規(guī)則，排列有序，肺泡腔紅細胞滲出減少。各空氣+MK-801組較空氣組肺泡數(shù)量減少，肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則，排列紊亂，肺泡間隔無明顯變化，可見肺泡腔明顯紅細胞滲出。缺氧+MK-801組與缺氧對照組比，肺小動脈改變不明顯，空氣+MK-801組與空氣對照組比，肺小動脈改變不

10、明顯。 5.輻射狀肺泡計數(shù)（RAC）加入MK-801，減輕了缺氧所致RAC下降。各空氣+MK-801組與空氣對照組比較，RAC值小于后者。 6.肺血管形態(tài)測定缺氧+MK-801組較缺氧組，肺血管形態(tài)有改善。缺氧10天+MK-801組與缺氧10天組比，管壁面積/血管總面積（WA％）、管壁厚度（um）、管壁厚度/肺小動脈外徑（WT％）的p<0.05。空氣+MK-801組與空氣對照組比肺血管形態(tài)無差異。 結(jié)論: