ROCKⅡ在大鼠腦出血后血腫周圍組織中的表達(dá)及對(duì)出血后腦損傷的作用.pdf

1、目的: 觀察大鼠腦出血后血腫周圍腦組織中ROCKⅡ的表達(dá)規(guī)律及其在腦出血后腦損傷中的作用，ROCK特異性抑制劑Y-27632對(duì)大鼠腦出血后神經(jīng)功能、腦水腫、血腦屏障和細(xì)胞凋亡的影響，RhoA抑制劑胞外酶C3(exoenzyme C3）及凝血酶抑制劑阿加曲班對(duì)ROCKⅡ表達(dá)的影響。
　　 方法: 取雄性SD大鼠，采自體血（50μl）注入右側(cè)尾狀核制作腦出血模型，于注射后各時(shí)間點(diǎn)（0.5h、6h、12h、24h、48h、72h、5d

2、）處死大鼠并取右側(cè)尾狀核，采用Western blot方法檢測(cè)出血側(cè)ROCKⅡ含量的動(dòng)態(tài)變化。再取雄性SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組（作為對(duì)照組，同側(cè)尾狀核內(nèi)注射生理鹽水，S組），腦出血組（ICH組），exoenzyme C3組（C3組），Y-27632組，阿加曲班組(Arg組)。采自體血（50μl）注入右側(cè)尾狀核制作腦出血模型，C3、Y-27632、Arg組分別在出血后3h時(shí)經(jīng)針道將exoenzyme C3(2μg/mL)、Y-27632

3、( 2.5μg/mL )、阿加曲班（0.5μg/mL）原位注射入血腫中。于注射后各時(shí)間點(diǎn)（0.5h,6h,12h,24h,48h,72h,5d）處死大鼠并取右側(cè)尾狀核，采用免疫組化方法檢測(cè)出血側(cè)ROCKⅡ的含量變化及分布。在出血后24h（ROCKⅡ表達(dá)高峰時(shí)間點(diǎn)）時(shí)采用干濕重法測(cè)腦組織含水量，TUNEL原位標(biāo)記法檢測(cè)血腫周圍凋亡細(xì)胞數(shù)量，伊文思藍(lán)（EB）測(cè)血腦屏障（BBB）通透性，出血48h時(shí)HE染色法觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)將以上結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)分析。
　　 結(jié)果: 在造模后0.5 h，各組病灶周圍即可見ROCKⅡ陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，ICH組、Arg組、C3組24 h達(dá)高峰，以后逐漸下降，但在12h后（包括12h）相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)Arg組、C3組的ROCKⅡ表達(dá)水平明顯低于ICH組（P＜0.01）。假手術(shù)組病灶周圍ROCK的表達(dá)水平均明顯低于腦出血組，且細(xì)胞著色淺，不同時(shí)間點(diǎn)并且沒有變化趨勢(shì)。腦出血組western-blotting蛋白條帶所顯示ROCKⅡ蛋白表達(dá)趨勢(shì)和免疫組化結(jié)

5、果一致。ICH組、Arg組、C3組、Y-27632組出血側(cè)腦組織含水量分別為83.63±0.55％、79.46±1.27％、80.10±1.07％、78.08±0.83％，Arg組、C3組、Y-27632組和ICH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同Arg組、C3組、Y-27632組比較，ICH組血腫周圍組織中可見到更多TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞（P<0.01，C3組 P<0.05）及炎癥細(xì)胞，且腦組織EB含量高于Arg組、C3組、Y-27632組（P<