Ezrin和merlin基因在胰腺癌細胞中的表達及意義.pdf

1、目的：研究ezrin和merlin基因在胰腺癌細胞中的表達情況，并觀察轉(zhuǎn)染野生型的ezrin和merlin基因后，對胰腺癌細胞生物學(xué)行為的影響。
　　 方法：應(yīng)用RT-PCR與Western blot方法檢測ezrin和merlin基因在人正常胰腺導(dǎo)管上皮細胞(HPDE)及人胰腺癌細胞(COLO357、SW1990、PANC1、CAPAN1、CAPAN2、CFPAC1和BXPC3)中的mRNA和蛋白表達水平；應(yīng)用DNA測序的方法

2、對在胰腺癌中表達的ezrin和merlin兩種基因進行序列分析；利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒(pcDNA3.1+HA-ezrin和pcDNA3.1+HA-merlin)轉(zhuǎn)染入人胰腺癌細胞株SW1990中，應(yīng)用掃描電子顯微鏡、MTT實驗、流式細胞學(xué)技術(shù)、Transwell遷移實驗和細胞-基質(zhì)黏附實驗來觀察兩組轉(zhuǎn)染基因?qū)毎螒B(tài)結(jié)構(gòu)、生長增殖能力、細胞周期及凋亡、細胞遷移和黏附能力的影響。
　　 結(jié)果：Ezrin和merlin基因在8株細胞

3、中均有不同程度的表達，其表達水平與胰腺癌細胞的分化程度無關(guān)；通過對胰腺癌細胞中表達的ezrin和merlin基因CDS區(qū)測序發(fā)現(xiàn)，ezrin基因DNA序列與基因庫序列完全一致，而merlin基因在第7外顯子的第1074位點存在堿基G的插入，第8外顯子的第1116和1142位點存在堿基T的缺失，編碼氨基酸第211位至第233位序列發(fā)生改變，表明在胰腺癌細胞中表達的Ezrin是野生型蛋白，而Merlin是突變型蛋白，失去了抑癌作用。West

4、ern blot顯示轉(zhuǎn)染后細胞過度表達Ezrin蛋白對細胞內(nèi)突變型Merlin蛋白表達情況無明顯影響；經(jīng)野生型merlin基因轉(zhuǎn)染后細胞，野生型Merlin蛋白的表達對Ezrin蛋白的表達亦無明顯影響。與對照組相比較，轉(zhuǎn)染野生型ezrin基因的SW1990細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯改變，而轉(zhuǎn)染野生型merlin基因的SW1990細胞，貼壁細胞數(shù)量減少，細胞表面微絨毛及絲狀偽足明顯減少；轉(zhuǎn)染野生型ezrin和merlin基因的SW1990細胞其生

5、長速度緩慢(P＜0.01)；轉(zhuǎn)染細胞的細胞周期改變表現(xiàn)為G1期細胞增多，S期細胞減少(均為P＜0.05)；細胞與基質(zhì)的黏附能力有明顯下降(P＜0.01)；且轉(zhuǎn)染merlin的SW1990細胞其遷移能力亦有明顯降低(P＜0.05)，而轉(zhuǎn)染ezrin的SW1990細胞其遷移能力無明顯統(tǒng)計學(xué)意義的改變(P＞0.05)。Ezrin和Merlin蛋白的過度表達對細胞的生長增殖能力、細胞周期、遷移能力以及細胞-基質(zhì)黏附能力均有一定的影響。