蘭索拉唑通過抑制幽門螺桿菌誘導的NF-κB和Akt激活下調(diào)胃上皮細胞表達COX-2.pdf

1、目的：研究蘭索拉唑（LPZ）在體外對幽門螺桿菌(Hp)感染胃上皮細胞后誘導表達環(huán)氧化酶2（COX-2）及前列腺素 E2（prostaglandin，PG）的影響，同時，觀察該效應 LPZ處理前后是否與核因子κB（NF-κB）和Akt通路的改變有關，從而了解LPZ潛在的免疫調(diào)控作用及其分子機制。
　　方法：采用RPMI-1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)胃上皮細胞系AGS，并根據(jù)不同的實驗目的分為5組：（1）空白對照組：僅給予0.1％ DMSO

2、；（2）Hp感染組：用感染復數(shù)（MOI）為100的Hp感染細胞24h；（3）LPZ干預組：Hp感染前加入0～100μmol/L LPZ作用3h，100 MOI的Hp感染24h。乳酸脫氫酶實驗篩選LPZ的最大作用濃度；（4）NF-κB抑制劑PDTC干預組：Hp感染前加入PDTC作用30 min，100 MOI的Hp感染24h；（5）PI3K抑制劑LY294002干預組：Hp感染前加入LY294002作用30 min，100 MOI的Hp感

3、染24h。實時定量PCR和Western blot分別檢測處理前后COX-2的mRNA和蛋白的表達；ELISA檢測PGE2分泌水平。提取細胞核蛋白與胞漿蛋白，Western blot檢測細胞內(nèi)NF-κB和Akt的激活情況。
　　結果：
　?。?）與對照組AGS細胞相比，Hp感染后AGS細胞COX-2 mRNA及蛋白表達水平顯著增高；LPZ（100μmol/L）、NF-κB抑制劑PDTC和PI3K抑制劑LY294002預處理均

4、可明顯降低Hp誘導的COX-2 mRNA及蛋白表達水平。
　?。?）與對照組AGS細胞相比，Hp感染后AGS細胞PGE2含量顯著增高； LPZ（100μmol/L）預處理可明顯降低Hp誘導的PGE2分泌。同樣，PDTC和LY294002也能抑制Hp誘導的PGE2的產(chǎn)生。
　?。?）Western blot結果顯示，Hp感染能誘導AGS細胞NF-κB p65亞基核轉位，而LPZ預處理后細胞核內(nèi)p65亞基含量明顯減少。此外，Hp