槲皮素對結腸癌LOVO細胞的增殖、侵襲及癌胚抗原CEA表達的影響.pdf

1、背景和目的:
　　TGF-β(Transforming growth factorβ，TGF-β)信號通路在細胞生物學功能方面有著重要作用，它的功能失常常導致腫瘤的發(fā)生。TGF-β信號通路是通過調節(jié)腫瘤細胞的增殖、侵襲轉移、免疫及細胞間微環(huán)境來促進腫瘤的惡性發(fā)展。結腸癌標志物癌胚抗原CEA(Carcinoembryonic antigen，CEA)作為細胞間的粘附分子，在多種腫瘤中出現(xiàn)過表達，具有潛在增強腫瘤侵襲轉移能力的作用。C

2、EA的表達量對腫瘤預后的評估和腫瘤療效的監(jiān)測及評估有著重要的價值。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β信號通路不僅具有調節(jié)腫瘤增殖、侵襲能力的功能，還具有刺激結腸腫瘤過量分泌表達CEA的作用。槲皮素(Quercetin)是一類天然類黃酮物質，廣泛存在于各類蔬菜水果，比如茶葉、蘋果、洋蔥及趕黃草等，具有抗炎、抗氧化和擴張血管等功能。在歐美等國家，槲皮素已經(jīng)被推薦為天然的潛力抗癌藥物。本實驗致力于通過一種新的治療性藥物槲皮素來抑制結腸癌LOVO細胞的增殖、

3、侵襲能力及CEA的表達的研究，為更好地理解TGF-β信號通路在腫瘤中的作用和槲皮素的潛在抗結腸癌作用提供理論基礎。
　　方法:
　　一、槲皮素(Quercetin)通過TGF-β1/smad3/c-myc信號通路抑制LOVO細胞增殖
　　1、實驗以5ng/ml的TGF-β1誘導刺激1周的LOVO細胞為細胞模型，共分四組:對照組（C組）、TGF-β1組（T組）、TGF-β1+Quercetin組（TQ組）、Quercet

4、in組（Q組）。C組為正常的LOVO細胞;T組為用5ng/ml的TGF-β1刺激細胞1周的LOVO細胞;TQ組為以5ng/ml的TGF-β1刺激細胞1周后，再使用20umol/L Quercetin處理的LOVO細胞;Q組為只使用20umol/L Quercetin處理的LOVO細胞。
　　2、采用MTT法、平板克隆等檢測方法分析槲皮素和TGF-β1對LOVO細胞增殖能力、克隆形成能力。
　　3、采用免疫組化、逆轉錄PCR、

5、免疫印跡法等檢測方法分析槲皮素和TGF-β1對LOVO細胞smad3及c-myc基因表達的影響。
　　二、槲皮素對結腸癌LOVO細胞侵襲能力及癌胚抗原CEA表達的影響
　　1、實驗分兩組:對照組和槲皮素組。對照組為正常LOVO細胞;槲皮素組為以不同藥物濃度處理的LOVO細胞。
　　2、采用內皮細胞粘附實驗和小室侵襲實驗檢測槲皮素對LOVO細胞侵襲能力的影響。
　　3、采用細胞免疫熒光、逆轉錄PCR及免疫印跡法檢測

6、槲皮素對LOVO細胞癌胚抗原CEA表達的影響。
　　結果:
　　一、槲皮素通過TGF-β1/smad3/c-myc信號通路抑制LOVO細胞增殖
　　1、與對照組相比，T組LOVO細胞增殖能力、smad3及c-myc的表達強于對照組(P＜0.05);Q組和TQ組LOVO細胞增殖能力、smad3及c-myc的表達較對照組減弱（P＜0.05）。
　　2、TQ組與Q組相比較，TQ組增殖能力和c-myc的表達弱于Q組（P＜

7、0.05），而smad3的表達兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　二、槲皮素對結腸癌LOVO細胞侵襲能力及癌胚抗原CEA表達的影響
　　1、與對照組相比，槲皮素組的LOVO細胞粘附能力增強和侵襲能力減弱（P＜0.05）。
　　2、與對照組相比，槲皮素組的LOVO細胞的癌胚抗原CEA mRNA表達水平和蛋白表達水平減弱（P＜0.05）。
　　結論:
　　1、TGF-β1能促進LOVO細胞增殖、sma