腎虛骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨、腎、下丘腦OPG-RANKL的mRNA及蛋白表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：本論文研究腎虛骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨、腎、下丘腦組織OPG/RANKL相關(guān)蛋白的活性變化，解析破骨細(xì)胞的分化、調(diào)節(jié)及信號傳導(dǎo)，闡明腎虛骨質(zhì)疏松癥證候病機的分子生物學(xué)基礎(chǔ)；補腎中藥進(jìn)行干預(yù)后，通過調(diào)控上述蛋白的活性變化，為臨床防治骨質(zhì)疏松癥的合理用藥提供科學(xué)的實驗依據(jù)。
　　 材料與方法：去卵巢方法建立腎虛骨質(zhì)疏松癥大鼠模型，應(yīng)用補腎填精、壯骨益髓的中藥復(fù)方進(jìn)行干預(yù)，正常大鼠作為標(biāo)準(zhǔn)對照，模型大鼠作為空白對照，同時用骨疏康顆粒劑

2、、蓋天力片作為陽性對照，補脾中藥作為相互對照。給藥12周后，經(jīng)無菌取材及實驗指標(biāo)檢測：用RT-PCR法、Western blotting法檢測股骨、腎、下丘腦組織OPG/RANKL的mRNA及蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．RT-PCR法檢測：股骨、腎、下丘腦存在OPG/RANKL的基因表達(dá)：測股骨上1/30PG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組股骨OPG基因表達(dá)顯

3、著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？战M比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、骨疏康組均可不同程度上調(diào)股骨OPG基因表達(dá)（P<0.01），其中蓋天力組（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05）模型空白組股骨RANKL基因表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？战M比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度上調(diào)股骨OPG基因表達(dá)（P<0.01

4、）。測腎OPG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無明顯差異（P>0.05），模型空白組腎OPG基因表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組可上調(diào)OPG基因表達(dá)（P<0.01），蓋天力組、骨疏康組統(tǒng)計結(jié)果為（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組腎RANKL基因表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？?/p>

5、組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度上調(diào)腎RANKL基因表達(dá)（P<0.01），有顯著性差異。測下丘腦OPG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組下丘腦OPG基因表達(dá)顯著上升（P<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度下調(diào)下丘腦OPG基因表達(dá)（P<0.01）；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL

6、指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組下丘腦RANKL基因表達(dá)顯著上升（P<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度下調(diào)RANKL基因表達(dá)（P<0.01）。
　　 2．Western blotting法檢測：股骨、腎、下丘腦存在OPG/RANKL蛋白表達(dá)：測股骨上1/30PG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組

7、股骨OPG蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？战M比較，補腎中藥高劑量組、蓋天力組、骨疏康組可上調(diào)股骨OPG蛋白表達(dá)（P<0.01），其中低劑量組、補脾組（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05）模型空白組RANKL蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？战M比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度上調(diào)RANKL蛋白表達(dá)（P<

8、0.01），差異顯著。測腎OPG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組腎OPG蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.01），用藥12周后，與?？战M比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、蓋天力組可上調(diào)腎OPG蛋白表達(dá)（P<0.01），骨疏康組也可上調(diào)OPG蛋白表達(dá)（P<0.05），補脾組（P>0.05）；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組RANKL蛋白表達(dá)顯著下降（P

9、<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度上調(diào)腎RANKL蛋白表達(dá)（P<0.01），差異顯著，補脾組（P>0.05）。測下丘腦OPG/RANKL，與正常組比較，假手術(shù)組OPG指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組下丘腦OPG蛋白表達(dá)顯著上升（P<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度下調(diào)下丘腦OPG基因表達(dá)（P

10、<0.01）；與正常組比較，假手術(shù)組RANKL指標(biāo)無顯著性差異（P>0.05），模型空白組下丘腦RANKL基因表達(dá)顯著上升（P<0.01），用藥12周后，與模空組比較，補腎中藥低劑量、高劑量組、補脾組、蓋天力組、骨疏康組均可不同程度下調(diào)RANKL基因表達(dá)（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1．正常大鼠骨、腎、下丘腦組織可以在基因及蛋白水平表達(dá)OPG/RANKL，表明正常鼠骨、腎、下丘腦組織中存在DPG/RANKL，其