滋補(bǔ)脾陰方藥對背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元缺氧損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：研究滋補(bǔ)脾陰方藥對背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元缺氧損傷的保護(hù)作用，并初步探討其作用機(jī)理。 方法： 1．取新生24h SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)（DRG），利用貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元。并用差速貼壁法及阿糖胞苷干預(yù)對細(xì)胞進(jìn)行純化。 2．對培養(yǎng)至4天純化好的細(xì)胞行原位免疫熒光鑒定確認(rèn)為DRG神經(jīng)元。對預(yù)保護(hù)24小時的細(xì)胞行免疫熒光檢測，對比各組細(xì)胞的數(shù)量及觀察細(xì)胞突起生長情況。 3．MTT法計算細(xì)胞存活率及細(xì)胞活

2、力，篩選藥物最佳藥物濃度。 4．利用紅外光譜對含藥血清和空白血清成分進(jìn)行測定，確認(rèn)含藥血清和空白血清成分有所不同，滋補(bǔ)脾陰方藥確實進(jìn)入到血清中。 5．利用Na2S2O4建立細(xì)胞缺氧損傷模型，采用黃嘌呤氧化酶法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SOD含量；TAB法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中MDA含量；酶活力法測定LDH。 6．統(tǒng)計學(xué)處理：所有試驗均重復(fù)10次，應(yīng)用SPSS16．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計。實驗結(jié)果數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異

3、比較用單樣本方差t檢驗，P<0．05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)果： 1、熒光顯微鏡下觀察含藥血清組細(xì)胞數(shù)明顯多于空白血清組及空白對照組，含藥血清組細(xì)胞突起生長更密集，交織成網(wǎng)狀，熒光亮度更強(qiáng)。 2、缺氧損傷后，1%濃度的含藥血清組細(xì)胞存活率為0．537±0．010，高于損傷對照組細(xì)胞存活率0．221±0．033（P<0．01），亦高于同濃度空白血清組細(xì)胞存活率0．228±0．039（P<0．01），接近NGF組細(xì)胞存

4、活率0．549±0．006（P>0．05）。 3、1%濃度的含藥血清可以預(yù)防缺氧損傷后DRG神經(jīng)元SOD含量的下降，減少M(fèi)DA及LDH的生成。而同濃度的空白血清對DRG神經(jīng)元無明顯的預(yù)保護(hù)及抗缺氧損傷作用。 結(jié)論： 1．滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清對神經(jīng)元的生長有促進(jìn)作用； 2．滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清具有提高神經(jīng)元抗缺氧損傷能力的作用； 3． 1%濃度時滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清能發(fā)揮最佳促進(jìn)生長及抗缺氧的保護(hù)作