阿司匹林對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 作為非甾體抗炎藥的代表藥物，阿司匹林發(fā)揮作用的主要機(jī)制為抑制環(huán)氧化酶的活性，使前列腺素的合成減少。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林對(duì)體內(nèi)外致癌物誘發(fā)性腫瘤及移植性腫瘤、體外腫瘤細(xì)胞系均有腫瘤抑制作用。在國(guó)外，阿司匹林已被列為腫瘤化學(xué)預(yù)防劑。目前，關(guān)于阿司匹林防治腫瘤的具體機(jī)制還未闡明。因此，本研究以小鼠S180肉瘤為研究對(duì)象，觀察阿司匹林對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響，并通過(guò)檢測(cè)阿司匹林對(duì)腫瘤微血管和淋巴管生成的影響

2、，旨在探討阿司匹林抑制腫瘤生長(zhǎng)的可能機(jī)制，為臨床腫瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.采用噻唑藍(lán)(MTT)法觀察阿司匹林在貼壁前后加入培養(yǎng)液中對(duì)S180肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　 2.建立S180肉瘤小鼠皮下荷瘤模型，隨機(jī)分為荷瘤對(duì)照組、化療(5-FU)組、阿司匹林高、低劑量組和聯(lián)合治療(5-FU+阿司匹林低劑量)組。測(cè)量腫瘤體積并計(jì)算抑瘤率，描繪腫瘤體積增長(zhǎng)曲線，觀察阿司匹林對(duì)S180移植瘤生長(zhǎng)的影

3、響。
　　 3.常規(guī)HE染色，光鏡下觀察S180肉瘤組織病理變化。
　　 4.免疫組化法檢測(cè)各組S180肉瘤組織中微血管密度(MVD)、淋巴管密度(LVD)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)的變化。
　　 5.Western blot法檢測(cè)各組S180肉瘤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:

4、　　 1.MTT檢測(cè)阿司匹林對(duì)小鼠S180肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
　　 MTT實(shí)驗(yàn)顯示阿司匹林不論在貼壁前還是后加入均可抑制S180腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，加藥后調(diào)節(jié)PH可減弱生長(zhǎng)抑制作用但仍然可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　 2.阿司匹林對(duì)小鼠S180移植瘤生長(zhǎng)的影響
　　 與荷瘤對(duì)照組相比，5-FU組、阿司匹林高、低劑量組、聯(lián)合治療組腫瘤重量降低，抑瘤率分別為64.1％,33.5％,22.2％和70.1％(P＜0.05

5、)。聯(lián)合治療組和5-FU組抑瘤作用最強(qiáng)，腫瘤體積增長(zhǎng)速度最慢，與荷瘤對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。阿司匹林組的抑瘤率和腫瘤體積增長(zhǎng)雖然低于5-FU組，但動(dòng)物一般狀態(tài)較好，動(dòng)物體重繼續(xù)增長(zhǎng)。
　　 3.HE染色觀察各組S180肉瘤組織標(biāo)本的形態(tài)
　　 荷瘤對(duì)照組腫瘤組織少見凋亡形態(tài)學(xué)改變，少見核固縮，新生血管豐富。聯(lián)合治療組、5-FU組和阿司匹林高、低劑量組腫瘤組織內(nèi)血管減少，腫瘤細(xì)胞可見多種凋亡形態(tài)學(xué)改變，

6、核固縮，核碎裂等，片狀壞死多見，癌巢周圍有單核細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 4.阿司匹林對(duì)小鼠S180肉瘤組織中VEGF-A和VEGF-C蛋白表達(dá)的影響
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示，VEGF-A和VEGF-C陽(yáng)性產(chǎn)物主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞漿，陽(yáng)性染色表現(xiàn)為胞漿內(nèi)棕黃色或褐色染色。經(jīng)半定量圖像灰度值分析，與荷瘤對(duì)照組相比，聯(lián)合治療組、5-FU組與阿司匹林大高、低劑量組VEGF-A和VEGF-C的表達(dá)明顯降低，而且阿司匹林的作用呈劑量依賴

7、性(P＜0.05)。
　　 Western blot半定量檢測(cè)結(jié)果顯示，與荷瘤對(duì)照組相比，聯(lián)合治療組、5-FU組與阿司匹林高、低劑量組VEGF-A和VEGF-C的表達(dá)條帶均減弱，聯(lián)合治療組和5-FU組表達(dá)顯著降低(P＜0.05），而且阿司匹林的作用呈劑量依賴性。
　　 5.阿司匹林對(duì)小鼠S180肉瘤組織中MVD和LVD的影響
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示，CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞胞漿染色陽(yáng)性，呈棕黃色，微血管

8、散在分布，MVD計(jì)數(shù)顯示，聯(lián)合治療組、5-FU組與阿司匹林高、低劑量組對(duì)微血管密度有一定的抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記物D2-40標(biāo)記淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)淋巴管密度，聯(lián)合治療組、5-FU組與阿司匹林高、低劑量組對(duì)淋巴管生長(zhǎng)有一定的抑制作用，聯(lián)合治療組和阿司匹林高劑量組的淋巴管密度顯著降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 阿司匹林在體內(nèi)外對(duì)小鼠S180肉瘤有明顯