巴戟天環(huán)烯醚萜質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究.pdf

1、巴戟天為我國(guó)著名的“四大南藥”之一，《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部收載的巴戟天來源于茜草科植物巴戟天MorindaofficinalisHow.的根，具補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕功效，臨床用于治療陽(yáng)痿遺精、宮冷不孕、月經(jīng)不調(diào)、少腹冷痛、風(fēng)濕痹痛、筋骨痿軟等癥。廣東歷來是巴戟天的道地產(chǎn)區(qū)，全國(guó)絕大部分的巴戟天產(chǎn)自廣東，另外，廣西、福建、海南也有少量栽培。 巴戟天含蒽醌、環(huán)烯醚萜、寡糖、多糖等化學(xué)成分，其中環(huán)烯醚萜具有較強(qiáng)的抗炎

2、鎮(zhèn)痛功效，但對(duì)以環(huán)烯醚萜成分作為質(zhì)控指標(biāo)的研究還未見報(bào)道。本研究在多年來對(duì)巴戟天研究和巴戟天資源調(diào)查的基礎(chǔ)上，以環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分為指標(biāo)，對(duì)巴戟天的環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分進(jìn)行含量測(cè)定和指紋圖譜技術(shù)研究。現(xiàn)將研究結(jié)果概述如下： 第一部分文獻(xiàn)研究 查閱了大量的巴戟天藥材研究資源以及與本研究相關(guān)的資料，對(duì)巴戟天的本草考證、物種資料、栽培技術(shù)、化學(xué)成分、藥理作用、質(zhì)量控制等方面的研究及進(jìn)展情況進(jìn)行了總結(jié)。 第二部分實(shí)驗(yàn)研究

3、 一、巴戟天的資源調(diào)查 對(duì)廣東、廣西、福建、海南的巴戟天進(jìn)行了栽培情況、生態(tài)學(xué)和種質(zhì)資源調(diào)查，并收集了大量的巴戟天樣品。結(jié)果表明，巴戟天在廣東的栽培面積最大，在廣西、福建、海南只有少量栽培；巴戟天的生長(zhǎng)受溫度、光照、水分和土壤的影響較大；巴戟天在廣東、廣西、福建和海南的種質(zhì)資源有較大差異，這些都影響了巴戟天的質(zhì)量。 二、巴戟天環(huán)烯醚萜質(zhì)量控制評(píng)價(jià)方法的研究 (一)水晶蘭苷的快速分離和制備 本研究建立

4、了巴戟天根中主要環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分——水晶蘭苷的快速提取方法，即從巴戟天葉中提取水晶蘭苷。此方法避免了巴戟天根中多糖類物質(zhì)的干擾，方法簡(jiǎn)便、快速。 (二)水晶蘭苷的HPLC含量測(cè)定 目的：研究巴戟天根中水晶蘭苷的提取方法；了解水晶蘭苷在巴戟天中的分布規(guī)律。 方法：采用HPLC法，色譜條件為KromalsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)。流動(dòng)相：(1)提取方法：甲醇-0.4％磷酸水溶液(10∶90)；

5、(2)含量測(cè)定：甲醇-0.4％磷酸水溶液(0∶100→28.8∶71.2，15min)為流動(dòng)相。流速1mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)231nm；柱溫25℃。 結(jié)果與結(jié)論： 1.巴戟天根中水晶蘭苷的提取方法學(xué)考察 對(duì)水晶蘭苷的提取進(jìn)行了系統(tǒng)的提取方法學(xué)考察，結(jié)果表明，用100ml的80％甲醇超聲提取2次，每次30min，水晶蘭苷的提取率最高。 2.不同生長(zhǎng)期巴戟天中水晶蘭苷的含量測(cè)定 水晶蘭苷的含量受種

6、植時(shí)間的影響較大，即隨種植時(shí)間的增加而增加。2.5～3.5年、3.5～4.5年、4.5～5.5年間，巴戟天中水晶蘭苷含量，相對(duì)于上一年的增幅分別為73.05％、4.59％、18.49％。說明巴戟天從種植后至3.5年左右的時(shí)期是水晶蘭苷成分的快速積累期，在種植3.5年后，水晶蘭苷成分緩慢增加。 3.不同產(chǎn)地巴戟天中水晶蘭苷含量測(cè)定 野生巴戟天與栽培巴戟天中水晶蘭苷成分積累的規(guī)律：3個(gè)不同來源的野生巴戟天，其水晶蘭苷的含量普

7、遍偏低(含量分別為9.54±1.37、12.15±0.13、8.20±0.08)；在同一地區(qū)(廣西東興或廣東德慶)，栽培品中水晶蘭苷的含量普遍高于野生品。 不同產(chǎn)地巴戟天中水晶蘭苷含量的變化規(guī)律：從測(cè)定結(jié)果看，廣東種質(zhì)的德慶、岑溪、玉林巴戟天，產(chǎn)地不同，其水晶蘭苷的含量有一定差異；在相同生長(zhǎng)年限的條件下，其含量隨緯度的變化而變化，即從東向西，樣品中水晶蘭苷的含量呈遞增趨勢(shì)。上述水晶蘭苷含量的規(guī)律性改變，說明巴戟天在引種后，其質(zhì)量

8、發(fā)生了改變。 本實(shí)驗(yàn)采集到的樣品，生長(zhǎng)期均為4～5年，大多數(shù)樣品中水晶蘭苷的含量，要比廣東省德慶縣規(guī)范化種植(GAP)基地3.5年生巴戟天樣品中水晶蘭苷的含量要高，這為巴戟天的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了一定的參考依據(jù)。 4.巴戟天不同炮制品中水晶蘭苷含量與生品比較有較大差異，生巴戟天、巴戟肉、鹽巴戟天、制巴戟天中水晶蘭苷的平均含量分別為13.92mg·g-1、9.10mg·g-1、9.21mg·g-1、12.86mg·g-1，巴戟天

9、炮制后水晶蘭苷的含量降低，說明巴戟天在經(jīng)蒸、煮等炮制工序?qū)Π完熘兴m苷的含量均有不同程度影響，且蒸法、鹽蒸法對(duì)其的影響更大。因此，應(yīng)分別制訂巴戟天及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 5.對(duì)巴戟天不同部位中水晶蘭苷的測(cè)定結(jié)果表明：不同產(chǎn)地(廣東、廣西)來源的巴戟天，根和葉均含有水晶蘭苷，且葉中水晶蘭苷的含量要大于根；除海巴戟果和羊角藤外，所有樣品都含有水晶蘭苷，其中以巴戟天的根、葉含量較高。因此，從巴戟天資源的開發(fā)和利用角度而言，巴戟天葉

10、中水晶蘭苷含量高，生長(zhǎng)周期短，可以以巴戟天葉為原料，提取水晶蘭苷。 6.商品巴戟天中水晶蘭苷的含量差異很大，含量范圍從1.27～19.03mg·g-1不等，廣西南寧、廣西玉林、廣州清平商品巴戟天各樣品中水晶蘭苷含量的RSD分別為37.78％、18.00％和33.16％，說明上述藥市商品巴戟天的質(zhì)量參差不齊；河北安國(guó)樣品中水晶蘭苷含量較低；海南萬(wàn)寧的野生樣品與清平市場(chǎng)上收集的野生樣品中水晶蘭苷的含量十分接近。如果以廣東省德慶縣巴戟

11、天規(guī)范化種植基地的4.5年生樣品中水晶蘭苷的含量為指標(biāo)，則合格率僅為22.58％。說明大多數(shù)巴戟天商品，其生長(zhǎng)年限均未達(dá)到4.5年，且質(zhì)量參差不齊。 另外，在購(gòu)買樣品過程中，在廣州清平藥材市場(chǎng)購(gòu)買到2批野生巴戟天(廣州清平8、10)，其外觀特征(大小、質(zhì)地、顏色等)與野生品極為相似。從含量測(cè)定結(jié)果來看，這2個(gè)樣品中水晶蘭苷的含量都偏低(分別為7.14±1.68mg·g-1和8.01±0.53mg·g-1)，與野生巴戟天中水晶蘭苷

12、含量(廣東德慶9.54±1.37mg·g-1，廣西東興12.15±0.13mg·g-1，海南萬(wàn)寧8.20±0.08mg·g-1)偏低的情況相吻合。但這兩批樣品是否為真正的野生，還須結(jié)合其它化學(xué)成分及指紋圖譜才能確定。 (三)環(huán)烯醚萜指紋圖譜技術(shù)研究 目的：進(jìn)行環(huán)烯醚萜指紋圖譜方法學(xué)研究；研究不同來源的巴戟天環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分的HPLC指紋圖譜的差異，為巴戟天的質(zhì)量控制提供科學(xué)資料。 方法：采用HPLC法，色譜條件

13、為KromalsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.4％磷酸水溶液(0:100→58.30∶41.70，35min)為流動(dòng)相；流速1mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)231nm；柱溫25℃。 結(jié)果與結(jié)論： 1.巴戟天環(huán)烯醚萜色譜指紋圖譜和共有峰的建立 從巴戟天HPLC指紋圖譜中可分離出近40個(gè)色譜峰，經(jīng)比較10批規(guī)范化種植基地樣品的圖譜，從中選定7個(gè)共有峰作為可以構(gòu)成巴戟天環(huán)烯醚萜指紋圖譜的穩(wěn)定的特

14、征峰，測(cè)得其相對(duì)百分含量大于90％。為易于辨認(rèn)和分析，將指紋圖譜分為3個(gè)區(qū)：主峰區(qū)(Ⅰ區(qū))——從圖譜10～17min的區(qū)域，主要包括特征峰1、2，是鑒別巴戟天是否為野生，以及真?zhèn)蔚闹匾獏^(qū)域；特征峰區(qū)(Ⅱ區(qū))——從圖譜17～23min的區(qū)域，主要包括峰3、峰4和峰5，本區(qū)是鑒別不同種質(zhì)、不同產(chǎn)地巴戟天的區(qū)域；指紋峰區(qū)(Ⅲ區(qū))——從圖譜23～35min的區(qū)域，包括峰6和峰。 2.對(duì)不同來源的樣品的指紋圖譜相似度計(jì)算表明：不同生長(zhǎng)年限

15、、不同種質(zhì)、不同產(chǎn)地、不同炮制品指紋圖譜的相似度均大于0.94；巴戟天混偽品的相似度均小于0.94，因此可以利用指紋圖譜相似度分析，將巴戟天混偽品與正品區(qū)別開來。 3.不同來源的巴戟天在指紋圖譜主峰區(qū)(Ⅰ區(qū))、特征區(qū)(Ⅱ區(qū))和指紋區(qū)(Ⅲ區(qū))都有一定的區(qū)別，對(duì)比三個(gè)區(qū)的異同，可有效地鑒別不同來源(野生與栽培、不同來源、巴戟天混偽品)的樣品。 4.巴戟天指紋圖譜在炮制后指紋圖譜色譜峰數(shù)目發(fā)生了改變。峰2與峰3之間增加了幾個(gè)色