野百合堿誘導的大鼠肺動脈平滑肌細胞增殖、凋亡及survivin表達的相關研究.pdf

1、目的：
　　 本實驗通過建立野百合堿(MCT)誘導的肺動脈高壓(PH)大鼠模型,研究該模型肺血管構型重建過程中肺動脈平滑肌細胞增殖與凋亡的關系,并探討凋亡抑制因子survivin在肺血管構型重建(PVSR)中的表達和意義,為改善PH患者的臨床癥狀提供實驗依據。
　　 方法：
　　 將40只大鼠隨機分為2組:Control組(n=20)為生理鹽水對照組和MCT組(n=20)為野百合堿實驗組。MCT組采用MCT誘導建

2、立肺動脈高壓大鼠模型,Control組注射等量生理鹽水。Control組和MCT組在建模后2周[2周Control組(n=10)和2周MCT組(n=10)]和4周[(4周Control組(n=10)和4周MCT。組(n=10)]兩個時間點分別對各組大鼠,通過右心導管法檢測肺動脈平均壓(mPAP),之后處死動物,收集標本分別計算右心室肥厚指數(shù)(RVHI),HE染色法觀察肺小動脈結構、測量小動脈管徑及管壁厚度、計算管壁厚度與血管外徑比值(W

3、T％)以反映肺血管的形態(tài)學改變情況,應用免疫組織化學染色法檢測增殖細胞核抗原(PCNA)的表達,以反映肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)增殖情況,并使用原位缺口末端DNA標記技術(TUNEL法)檢測肺小動脈平滑肌細胞的凋亡情況,分別計算增殖指數(shù)(PI)、凋亡指數(shù)(AI)及PI/AI。應用免疫組織化學染色和Western Blot檢測大鼠肺小動脈組織中survivin的表達。
　　 結果：
　　 1.MCT組mPAP、WT％

4、明顯高于Control組(2周MCT組P＜0.05,4周MCT組P＜0.001),4周MCT組以上各項指標明顯高于2周MCT組(P＜0.01)。4周MCT組RVHI明顯高于4周Control組(P＜0.01),2周MCT組RVHI和2周Control相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),4周MCT組RVHI明顯高于2周MCT組。HE染色標本上可見,2周MCT組、4周MCT組肺動脈肌層及內膜均有不同程度的增厚,以管腔狹窄、肺動脈重構明顯,Co

5、ntrol組血管內膜光滑、內皮細胞連續(xù),管壁薄,厚度均勻一致。
　　 2.與Control組相比MCT組PI、AI均明顯升高(P＜0.01),且PI/AI比值也明顯升高(P＜0.01)。4周MCT組PI、PI/AI明顯高于2周MCT組(P＜0.01),4周MCT組AI高于2周MCT組(P＜0.05),PI/AI與WT％成顯著正相關(r=0.881,P＜0.001)。
　　 3.免疫組織化學染色及Western blot檢

6、測結果顯示:MCT組免疫組織化學染色(IH)分值及Wester Blot(WB)IOD值顯著高于Control組(P＜0.001),4周MCT組以上指標均明顯高于2周MCT組(P＜0.01)。Survivin蛋白表達與WT％、PI/AI比值呈顯著正相關(r=0.78,P＜0.001；r=0.948,P＜0.001)。
　　 結論：
　　 1.PH的形成過程中,肺動脈平滑肌細胞的增殖與凋亡都明顯增加,但增殖與凋亡的比例也明