腫瘤組織浸潤淋巴細胞在食管癌中表達及與預后的關系.pdf

1、食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。盡管采用手術、放療和化療的聯(lián)合治療,5年生存率仍然較低,因此,分析與腫瘤預后有關的因素,對提高食管癌病人的生存率有重要價值。大量的臨床實踐中發(fā)現(xiàn),部分早期食管癌、結腸癌、賁門癌等在手術切除后不久就出現(xiàn)復發(fā)和轉移;而有些局部進展期腫瘤,甚至腫瘤沒被完全切除(R1或R2)的患者,術后仍能長期生存甚至治愈。大量的實例證明,確實存在著一些超越TNM分期、或分期以外的因素影響著腫瘤的治療效果。
　　腫瘤浸潤

2、淋巴細胞(tumor infiltrating lymphoc),tes,TILs)是存在于間質內(nèi)的一類異質性細胞群體,以T細胞為主。浸潤的淋巴細胞類型、密度和比例等反映了機體的抗腫瘤免疫反應狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn),TILs的數(shù)量和T細胞亞群與腫瘤的預后有明顯的關系,特別是腫瘤局部的免疫平衡,與患者術后的復發(fā)和長期生存等密切相關。細胞毒性T細胞(CTL)是控制腫瘤生長的潛在效應細胞。雖然有這類細胞的存在,但腫瘤仍能生長提示免疫調(diào)節(jié)失控。具有抑制

3、功能的CD4~+TCD25~+T調(diào)節(jié)性T細胞是CD4~+T細胞的一個亞群,表達CD25(IL-2Rα鏈)分子,通過細胞間接觸或分泌抑制性細胞因子來抑制CD4~+TCD25~-T細胞和CD8~+T細胞的活化和增殖。Foxp3是forkhead/winged-Helix轉錄因子家族的一員,目前被認為是Treg最具特異性的標志,而且Foxp3的表達在調(diào)節(jié)Treg發(fā)育和功能方面發(fā)揮重要作用。高表達的Foxp3不僅與不良預后有關,而且是預測總生存

4、和無疾病生存的獨立預后因子,但不同類型的腫瘤結論不一致。研究發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌患者腫瘤浸潤淋巴細胞以及瘤內(nèi)Treg數(shù)量明顯增多。在小鼠腫瘤模型研究表明去除Treg細胞可以引發(fā)抗腫瘤免疫反應。目前關于TILs在食管癌組織中的分布狀況與患者的預后關系國內(nèi)外少見報道。
　　本研究采用免疫組織化學的方法檢測食管癌組織中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、顆粒酶B(granzymeB,GrB)陽性細胞

5、的數(shù)量及分布情況,并分析它們與預后的關系,為食管癌預后的預測及個體化治療提供有效的實驗依據(jù)。目的檢測食管癌間質和癌巢中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、GrB~+T細胞的數(shù)量及分布特征,了解它們與食管癌臨床病理特征的關系,并探討與預后的關系。材料與方法1.臨床病理資料:90例食管癌手術標本作為研究對象。臨床、病理及隨訪資料完整;術前均未化療、放療。
　　實驗方法和結果判定:采用免疫組織化學技術(SP法)測定食管癌

6、組織中CD3、CD8、Foxp3、GrB標記的淋巴細胞的數(shù)量及分布。CD3、CD8在組織中陽性定位于胞膜,Foxp3陽性定位于胞核,三者均以棕黃色、棕褐色表達為陽性;GrB陽性定位于胞漿,棕黃色陽性顆粒環(huán)繞細胞核散在分布即為活化的CD8~+T細胞。按照陽性細胞數(shù)進行結果判定。3.統(tǒng)計學分析:非正態(tài)數(shù)據(jù)采用中位數(shù)和范圍(全距)表示;兩組比較采用非參數(shù)檢驗方法:Mann-Whitney檢驗方法;不同表達組的差異采用χ~2檢驗、生存率差異采用

7、Kaplan-Meier生存分析,并行Log-rank檢驗;預后多因素采用Cox比例風險模型,統(tǒng)計年齡、分期、組織學類型、分化程度等因素與生存率相關狀況。α=0.05為顯著性檢驗水準。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結果1 CD3~+T細胞呈圓形或橢圓形,大部分聚集在癌巢周邊的間質,呈灶狀或淋巴濾泡樣分布;少數(shù)細胞可浸入癌巢,直接與腫瘤細胞接觸。在間質、癌巢中陽性細胞數(shù)分別為153.2(10.8-369.8)、22.0

8、(0-146.6)個,差異有顯著性(P<0.01)。間質內(nèi)CD3~+T細胞的數(shù)量與腫瘤的浸潤深度呈負相關,P<0.05。CD3~+T細胞高表達組3年生存率較低表達組高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2 CD8~+T細胞呈圓形或橢圓形,大部分分布在間質中,呈灶狀或淋巴濾泡樣分布;少數(shù)細胞浸入癌巢,直接與腫瘤細胞接觸。在間質、癌巢中陽性細胞數(shù)分別為44.4(0-172.8)、4.9(0-43.2)個,差異有顯著性(P<0.01)。間質內(nèi)

9、CD8~+T細胞的數(shù)量與腫瘤的浸潤深度呈負相關,P<0.05。高分化組其表達高于低分化組,差異有顯著性(P<0.05)。CD8~+T細胞高表達組3年生存率較低表達組高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3 Foxp3~+Treg細胞呈圓形或橢圓形,主要聚集在間質內(nèi),呈灶狀分布;少數(shù)細胞可浸入癌巢,直接與腫瘤細胞接觸。在間質、癌巢中陽性細胞數(shù)分別為12.5(0-72.4)、2.9(0-19.0)個,差異有顯著性(P<0.01)。間質內(nèi)Fo

10、xp3~+Treg細胞的數(shù)量與病變長度呈正相關,P<0.05。淋巴結轉移組數(shù)量高于無淋巴結轉移組,差異有顯著性(P<0.05)。Foxp3~+Treg細胞與預后呈負相關,數(shù)量越多,預后越差(P<0.05)。4 GrB~+T細胞無密集趨勢,散在分布于癌巢和間質。在間質、癌巢中陽性細胞數(shù)分別為12.5(0-38.6)、2.9(0-16.4)個,差異有顯著性(P<0.01)。間質內(nèi)GrB~+T的表達在淋巴結轉移組數(shù)量低于無淋巴結轉移組,差異有

11、顯著性(P<0.05)。GrB~+T細胞高表達組較低表達組具有生存優(yōu)勢,差異無顯著性(P>0.05)。5間質內(nèi)浸潤的CD3~+T細胞、CD8~+T細胞、Foxp3~+Treg細胞數(shù)量、TNM分期、病變長度均是影響預后的獨立因素,其中浸潤的CD3~+T細胞、CD8~+T細胞增多是預后良好的指標,而是Foxp3~+Treg細胞增多提示預后不良。結論食管癌間質中CD3~+T細胞、CD8~+T細胞、Foxp3~+Treg細胞、GrB~+T細胞數(shù)

12、量明顯多于癌巢。間質中浸潤的CD3~+T細胞、CD8~+T細胞、Foxp3~+Treg、GrB~+T細胞與浸潤深度、淋巴結轉移、病變長度、分化程度有關。腫瘤組織局部CD3~+T、CD8~+T細胞高表達組3年生存率高于低表達組,GrB~+T細胞高表達組較低表達組有生存優(yōu)勢,而Foxp3~+Treg細胞高表達組生存率低于低表達組。間質浸潤的淋巴細胞數(shù)量可作為判斷預后的指標之一,CD3~+T、CD8~+T細胞增多預后良好,Foxp3~+Tre