核心蛋白聚糖的基因克隆及其在Pichia Pastoris中的表達和活性測定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文核心蛋白聚糖的基因克隆及其在PichiaPastis中的表達和活性測定姓名：郝小夏申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：王桂琴20060520山西醫(yī)科大學碩士學位論文AbstractDCNbelongstoamemberoftheexpandinggenefamilyencodingthesecreted，small，leucine—richproteoglycans(SLRPs)thataffectmatri

2、xassemblyandcellularproliferationTheeDNAofDCNexffon，wascomposedof1080bpofnucleotidesandencodedacoreproteinof395aminoacidsObjectives：Toestablishandusetheeukaryotic(PichiaPastoris)expressionsystemforexpressingDCNproteinMet

3、hods：@FulllengthDCNgeneWasamplifiedfromeDNAofDCNextronWasobtainedthroughhumanmusclebyusingsurivinspecificprimersThen，DCNeDNAwasinseaedintopPic9k，andverifiedbysequencing@VerifiedeDNAgenewassubclonedintopPic9kTherecombinan

4、tplasmidwaslinearizedbyrestrictionenzymecuringThelinearDCNgeneWaSintroducedintoHIS／GS115cellsbyLiACThetransformantsweretransferredontoYPDplatesthatcontaineddifferentconcentrationsofG418forselectingthepositiveclonesTheint

5、egratedeDNAinpositivecloneswasconfirmedbyPCR@SelectedtransformantswereculturedinBMMYmediumwith1％methanolforinducingtheexpressionofDCNprotein@AfteraperiodwhenHepG2livercancercelllineweretreatedwithDCNindifferentconcentrat

6、ionsandtime，thesuppressiveeffectofDCNonHepG2livercancercelllineweredetectedbycountingcellResults：①TheresultofsequencinghumaneDNAcomparedwiththeDCNsequenceintheGenBankisthesame②Wehavemadeupaneukaryotic(Pichiapastoris)expr

7、essivevector(pPic9k—DCN)AfterthelinearrecombinantvectorwasintroducedintoHIS一／GSl15cells，wehaveselectedpositiceclonesagainstG418(4mg／m1)andconfirmedbyPCR③DCNproteinreachedhi曲estconcentrationwhenexpressedforonedaysin1％meth

8、anolBMMYmedium@AfteraperiodwhenHepG2livercancercelllineweretreatedwithDCNindifferentconcentrationsandtime，theproliferationofHepG2livercancercelllinewereinhibitedbyDCNrespectivelyshowedcountingcellTheseresultsdemonstrated

9、thathadadosageandtimedependentrelationshipTherewasastatisticallysignificantdecreasedintheproliferationrateamongthethreegroupswithdifferentconcentrations(P005)Conclusions：ToexpressDCNcoreproteininPichiaPastorisispossibleI

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