肝癌微波消融聯(lián)合細胞免疫治療的實驗及臨床初步研究.pdf

1、肝癌是臨床進展較快的惡性腫瘤，目前主要治療方法為手術切除、肝移植、局部消融及經(jīng)動脈介入治療。局部消融治療小肝癌的遠期療效與手術切除相當，已被公認為是繼手術和肝移植之后的根治性治療方法之一，然而仍迫切需要探索新的療法，以解決高轉(zhuǎn)移復發(fā)率的難題。近20年來，過繼性細胞免疫治療發(fā)展迅速，有望成為肝癌的有效輔助治療方法之一。
　　 目的:摸索微波消融治療時有效滅活腫瘤細胞并釋放腫瘤抗原的溫控和能量條件；觀察肝癌消融后局部注射未成熟樹突狀

2、細胞對荷瘤小鼠生存期及腫瘤生長的影響；觀察肝癌微波消融聯(lián)合樹突狀細胞疫苗及效應細胞綜合過繼免疫治療的臨床安全性，研究微波聯(lián)合細胞免疫治療后近期外周血淋巴亞群比例及細胞因子濃度的變化，初步探討細胞免疫治療對肝癌微波消融后近期復發(fā)率的影響。
　　 材料與方法:
　　 1.模擬肝癌微波治療中常用消融區(qū)邊緣的溫控和能量條件，消融人肝細胞癌株SMMC-7721細胞懸液，分為五組：A、對照組，B、45℃10min組，C、50℃3mi

3、n組，D、54℃3min組，E、60℃即刻組，消融后30分鐘及2小時進行凋亡檢測。
　　 2.32只C57小鼠左例腹股溝皮下接種Hepal-6鼠肝癌細胞瘤塊作為消融瘤，間隔1周，右側(cè)腹股溝皮下接種瘤塊作為觀察瘤，成瘤后分為四組：A組，對照組，不行治療；B組，微波組，僅微波消融小鼠消融瘤；C組，成熟DC組(mDc組)，微波消融小鼠消融瘤，并于小鼠雙側(cè)腋下注射腫瘤抗原致敏的樹突狀細胞；D組，未成熟DC組(iDC組)，微波消融小鼠消融

4、瘤，并于消融瘤周注射未成熟樹突狀細胞。觀察瘤均不予處理，荷瘤后每7—8天測量瘤體大小，直至小鼠死亡。
　　 3.知情同意原則下，10例行根治性微波消融聯(lián)合多種免疫細胞過繼治療的原發(fā)性肝癌患者納入聯(lián)合組，同期符合相同入組條件的121例微波治療患者納入微波組。聯(lián)合組患者免疫治療方案設計為三個療程，治療前抽血45ml用于分離培養(yǎng)DC和效應細胞，在超聲造影引導下回輸?shù)礁蝺?nèi)消融區(qū)與充血帶交界區(qū)或在超聲引導下回輸?shù)礁构蓽狭馨徒Y(jié)內(nèi)及右上腹腹腔

5、內(nèi)。10例聯(lián)合組及24例微波組患者還于治療前及治療后1、3、6個月進行外周血淋巴細胞亞群及細胞因子檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外實驗：受微波熱損傷細胞主要表現(xiàn)為死亡，凋亡細胞比例??；在各溫控和能量條件下，隨溫度升高，存活細胞百分比降低，消融后2h與30min比，各消融組存活細胞比例顯著降低，其中60℃即刻組94.36％細胞均死亡或凋亡，其它組仍有較多存活細胞。
　　 2.體內(nèi)實驗：消融后12天，各治療組消融

6、瘤最大徑均顯著小于對照組，但治療組問無顯著差異，觀察瘤最大徑亦顯著小于對照組且iDC組明顯小于mDC組(p<0.05)；各治療組小鼠觀察120天，消融瘤原位滅活率均為37.5％，iDC組(87.5％)及mDc組(75％)觀察瘤消失率均高于單純微波組(62.5％)，iDC組最高；與對照組相比，各治療組小鼠生存期顯著延長，iDC組最長；iDC組及mDC組生命延長率高于單純微波治療組，iDC組最高。
　　 3.臨床研究：微波聯(lián)合免疫治

7、療54次細胞回輸未出現(xiàn)II級以上嚴重不良反應，治療后1、3、6個月患者血常規(guī)、肝腎功能及凝血功能與治療前比較均無顯著差異?；颊呓?jīng)微波消融聯(lián)合免疫治療后1、3、6個月，外周血CD8+CD28+淋巴細胞亞群百分比較治療前升高并顯著高于微波組，CD4+/CD8+較治療前降低并顯著低于微波組；治療后1和3個月，CD8+CD28-效應細胞亞群百分比較治療前顯著升高；治療后1個月，CD4+CD25highTreg細胞百分比較治療前顯著降低，并顯著低

8、于微波組，治療后3和6個月時，雖仍低于治療前但有所回升，且與消融組無差異。治療后1個月，聯(lián)合組IL-2濃度及IL-2/IL-4值較治療前增高，治療后3和6個月時回落。聯(lián)合組患者治療后3-9月內(nèi)局部腫瘤進展率及肝內(nèi)復發(fā)或肝外轉(zhuǎn)移率均較微波組有降低趨勢，但尚無統(tǒng)計學差異。聯(lián)合治療后1個月，57.14％患者產(chǎn)生了病毒應答。
　　 結(jié)論
　　 1)微波消融腫瘤細胞達到60℃，靜置2小時，94.36％腫瘤細胞死亡或凋亡，推測該溫控

9、條件及時間點是消融區(qū)邊緣未成熟樹突狀細胞回輸治療的較好選擇；
　　 2)肝癌微波消融聯(lián)合消融區(qū)邊緣注射未成熟DC，可延長小鼠生存期，并可使遠處腫瘤灶明顯縮小甚至消退；
　　 3)微波消融聯(lián)合樹突狀細胞和效應細胞過繼免疫治療肝癌在臨床實施中是安全的；
　　 4)聯(lián)合治療改善了機體免疫狀態(tài)，并可實現(xiàn)較高的病毒應答率，但是持續(xù)時間有限，提示現(xiàn)有治療方案需要縮短時間間隔、增加療程，并有必要進行抗病毒免疫治療改善患者整體免