Oligopainting在水稻染色體識別中的應用.pdf

1、染色體涂染技術即將整條染色體、某條染色體臂（長臂或短臂）或者染色體某個片段的DNA制備成探針，通過熒光原位雜交(FISH)的方法，將探針雜交到染色體上，從而分析和研究染色體的重組、畸變和同源基因。本研究中，我們以水稻為供試材料，通過生物信息學篩選出了日本晴第9號染色體上25000個的寡核苷酸構建成文庫，并將其標記為寡核苷酸探針(oligo probe)。通過FISH方法，觀察了日本晴、Chr11L·9L易位系、2個涉及第9號染色體的非整

2、倍體材料以及基因組為AAC的異源三倍體材料中有絲分裂及減數(shù)分裂過程中第九號染色體，揭示了oligopainting在水稻中的應用價值，主要研究結果如下:
　　1、在本研究中，我們設計了能夠覆蓋于日本晴第9號染色體0-23Mb的寡核苷酸文庫，包含25000個寡核苷酸，每個寡核苷酸包含45個堿基，然后經(jīng)過乳化PCR擴增、轉錄、反轉錄等步驟標記為第9號染色體寡核苷酸探針(oligo-chr9)。
　　2、oligo-chr9能夠清

3、晰準確地與日本晴有絲分裂和減數(shù)分裂細胞中的第9號染色體雜交，并且能夠追蹤第9號染色體在分裂過程各個時期的形態(tài)變化。結果顯示，該寡核苷酸探針可以應用于水稻細胞學的相關研究。
　　3、在本研究中，運用oligo-chr9對一個已知的Chr11L·9L易位系進行驗證，探究基于寡核苷酸探針的涂染技術在染色體結構變異方面的應用價值。結果顯示，在該易位系中，oligo-chr9探針能夠分別與兩對染色體的長臂和短臂進行特異雜交，并且結合Cent

4、O探針和5S rDNA探針，說明第9號染色體著絲粒區(qū)域發(fā)生不均等斷裂，11號染色體在5S rDNA區(qū)域發(fā)生斷裂，形成了兩對新染色體，Chr11L·9L和Chr9S·11S，驗證了之前的研究結果，同時說明該oligo-chr9探針可以應用于秈稻品種。
　　4、利用oligo-chr9探針對本實驗室若干染色體數(shù)目異常的水稻材料進行鑒定，最終鑒定出有兩個與第9號染色體有關的非整倍體材料，Y6077和Y6089。兩者均呈第9號染色體增多的

5、現(xiàn)象。其中Y6077為增加1條小染色體，由2個第9號染色體短臂所組成的等臂染色體，但其中一個短臂末端的45S rDNA區(qū)域缺失。Y6089增加了4條染色體，其中兩條為第9號染色體短臂形成的等臂染色體，但這2條染色體的著絲粒片段大小不一。
　　5、在基因組為AAC的異源三倍體材料中，我們運用oligo-chr9探針與該材料的根尖細胞染色體做熒光原位雜交，結果顯示第9號染色體在A組和C組中具有同源性，是相對保守的。運用oligo-ch