結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)濾液蛋白32的克隆表達(dá)及血清學(xué)診斷應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的： 構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)濾液蛋白32(culture filtrate protein 32，CFP32)的重組質(zhì)粒，在大腸桿菌中表達(dá)并純化重組CFP32，探討其在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法： PCR擴(kuò)增 cfp32基因片段，將其克隆到pET-21a表達(dá)載體。優(yōu)化表達(dá)條件，Ni-NTA親和層析方法純化重組CFP32蛋白。建立檢測(cè)CFP32抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法，并用于檢測(cè)160例臨

2、床血清標(biāo)本中的CFP32抗體。 結(jié)果： 克隆了cfp32基因，構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pET21a-CFP32，IPTG誘導(dǎo)在大腸桿菌中得到高表達(dá)CFP32蛋白包涵體，SDS-PAGE電泳在30 KD處得到條帶，純化得到高純度CFP32蛋白，PBS復(fù)性后測(cè)得蛋白含量為3.46 mg/mL。建立并優(yōu)化了CFP32檢測(cè)結(jié)核抗體的ELISA方法。97例臨床確診的肺結(jié)核患者中62例CFP32抗體陽(yáng)性，敏感性為63.9％；25例非結(jié)核病患者

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