STAT5在哮喘大鼠STATs信號傳導通路中的作用及其調(diào)控.pdf

1、目的： (1)研究支氣管哮喘(簡稱哮喘)大鼠STAT5介導的信號傳導通路在哮喘急性發(fā)作中的作用； (2)探討STAT5介導的信號傳導通路與IL-4、IFN-γ的關系，以及其對氣道炎癥形成的影響； (3)研究布地奈德、BCG多糖核酸對STAT5介導的信號傳導通路及IL-4、IFN-γ的調(diào)控作用。 方法：60只雄性SD大鼠隨機分成4組，分別是哮喘組(A組)、BCG多糖核酸組(B組)、布地奈德組(P組)和正常對

2、照組(C組)，每組15只。用卵白蛋白(OVA)制備大鼠哮喘模型，C組用不含OVA的氫氧化鋁凝膠代替抗原。各組大鼠于末次激發(fā)后麻醉并取材?？鼓鱁OS計數(shù)：血漿標本用EIASA測定IL-4和IFN-γ濃度；各組每只大鼠均經(jīng)左肺門結扎后右肺行支氣管肺泡灌洗并留取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid，BALF)，對BALF中的細胞進行計數(shù)和分類，同時用ELISA測定IL-4和IFN-γ的濃度；SYBRGRE

3、ENI熒光實時定量PCR法分別檢測肺組織和血單個核細胞中的STAT5bmRNA與IL-4mRNA的表達變化；免疫組化技術檢測STAT5b蛋白在支氣管上皮細胞的表達變化。光鏡下觀察細支氣管周圍炎癥浸潤情況：透射電鏡(TEM)觀察各組支氣管纖毛上皮細胞的變化。用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。 結果： (1)BALF中的炎癥細胞情況和血中EOS絕對值計數(shù)：A組BALF中細胞總數(shù)[(4.

4、29±1.52)×109/L]顯著高于C組、B組和P組[分別為(2.01±0.51)×109/L、(3.53±1.01)×109/L、(3.05±0.96)×109/L]，差別有統(tǒng)計學意義(均為P＜0.01)；A組BALF中的EOS、淋巴細胞百分比[(13.69±3.61)％、(24.91±6.19)％]分別高于C組[(1.25±0.63)％、(11.73±6.13)％](均為P＜0.01)；B組和P組的BALF中EOS、淋巴細胞百分比

5、[(6.77±2.09)％、(17.77±4.83)％，(3.80±1_38)％、(16.91±3.25)％]分別低于A組(P＜0.05)。另外，A組血EOS絕對值[(10.27±3.98)×108/L]分別高于B組、P組和C組[(4.54±2.80)×108/L、(3.95±2.13)×108/L、(1.84±0.95)×108/L](均為P＜0.01)；B組和P組EOS絕對值均高于C組(P＜0.01)。 (2)肺組織病理學改

6、變光鏡觀察結果：A組大鼠肺組織切片HE染色可見支氣管和血管周圍炎性細胞浸潤，以淋巴細胞、EOS為主，氣道腔內(nèi)可見黏液栓，氣道上皮多處斷裂；B組和P組的上述改變程度不一，明顯比A組的改變輕；C組則無上述表現(xiàn)。 (3)肺組織超微結構觀察結果：電鏡下C組顯示支氣管纖毛上皮細胞的纖毛排列整齊；A組支氣管上皮細胞纖毛排列稀疏或斷裂：B組和P組支氣管上皮細胞纖毛排列尚整齊。 (4)血漿及BALF中IL-4、IFN-γ的測定結果：A組

7、大鼠血漿和BALF中IL-4濃度為[33.27±8.32、21.90±7.48(pg/ml)]明顯高于B組[18.89±6.07、15.52±4.62(pg/ml)]、P組[17.42±4.01、13.31±4.53(pg/ml)]和C組[12.21±3.76、7.76±3.21(pg/ml)](均為P＜0.01)；B組和P組血漿中IL-4濃度則高于C組(P＜0.05)；B組和P組BALF中IL-4濃度則高于C組(P＜0.01)。A組、

8、P組血漿和BALF中IFN-γ濃度[11.62±3.78、6.91±2.19，19.06±5.59、11.90±4.17(pg/ml)]顯著低于C組[26.31±8.66、18.30±5.52(pg/ml)](P＜0.01)；B組血漿中IFN-γ濃度[21.16±6.72(pg/ml)]低于C組(P＜0.05)；B組BALF中IFN-γ濃度[13.18±4.74(pg/ml)]顯著低于C組(P＜0.01)；B組、P組血漿和BALF中IF

9、N-γ濃度顯著高于A組(P＜0.01)。 (5)各組大鼠肺組織和血單個核細胞中STAT5bmRNA和IL-4mRNA的測定結果：A組肺組織和血單個核細胞中STAT5bmRNA表達量(56.73±28.00、61.54±44.26)顯著高于B組(27.86±13.56、33.66±19.30)、P組(24.44±9.61、29.90±14.43)和C組(7.59±4.06、5.90±2.85)(均為P＜0.01)：B組(P＜0.0

10、1)和P組(P＜0.05)高于C組；B組和P組的表達量無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。A組血單個核細胞中IL-4mRNA表達量(68.88±35.90)顯著高于B組、P組和C組(28.76±13.02、25.64±9.63、7.79±4.79)(均為P＜0.01)；B組(P＜0.01)和P組(P＜0.05)高于C組；B組和P組的表達量無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (6)各組大鼠肺組織中STAT5b蛋白的測定結果：A組顯示支氣管上

11、皮細胞的胞漿呈棕黃色、且著色較深，其吸光度(LD)(0.211±0.070)顯著高于B組(0.113±0.033)、P組(0.107±0.042)和C組(0.048±0.016)(均為P＜0.01)：B組和P組支氣管上皮細胞STAT5b蛋白表達量高于C組(P＜0.01)；B組和P組的表達量無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (7)相關分析結果：各組STAT5bmRNA的表達量與IL-4mRNA表達量、STAT5b蛋白、IL-4濃度、

12、EOS含量分別呈正相關，與IFN-γ濃度呈負相關。 結論： (1)哮喘大鼠肺組織和血單個核細胞中STAT5bmRNA表達水平上調(diào)，氣道上皮細胞及血單個核細胞是主要的表達細胞；血單個核細胞中IL-4mRNA表達水平也上調(diào)，血和BALF中IL-4水平升高、IFN-γ水平下降。說明哮喘時存在IL-4/STAT5信號通道過度激活。 (2)STAT5bmRNA和STAT5b蛋白分別與IL-4mRNA、IL-4水平呈正相關，