蝎毒多肽對輻射損傷小鼠造血功能恢復的研究.pdf

1、背景和目的： 放射治療是臨床上腫瘤治療的重要手段之一。放療在清除殺傷腫瘤細胞的同時，對射線極為敏感的造血系統(tǒng)也受到嚴重損傷，引發(fā)一系列造血和免疫系統(tǒng)功能障礙而降低患者的生活質量并增加治療難度。如何在利用射線殺傷腫瘤細胞的同時保護機體正常的造血功能是目前岌待解決的問題之一。研究證明，由東亞鉗蝎蝎毒中分離出的蝎毒多肽(SVP)對多種腫瘤細胞有明顯抑制作用，可以增強放療對肝癌H<,22>荷瘤小鼠的抑瘤效果，還能夠加快清除照射后產(chǎn)生的自

2、由基，抑制輻射引發(fā)的脂質過氧化作用，具有一定的抗輻射損傷作用。前期實驗提示SVP能促進放、化療致骨髓抑制小鼠造血和免疫細胞數(shù)量的恢復，可能機制是通過其刺激造血生長因子的分泌而得以實現(xiàn)。本研究觀察了蝎毒多肽組分對輻射后早期造血細胞生長狀態(tài)的影響及其對放射致輻射損傷小鼠骨髓造血干/祖細胞的作用，并探討了蝎毒多肽發(fā)揮作用的可能機制及信號途徑。 材料和方法： 1．蝎毒多肽組分對輻射后早期造血細胞增殖作用的研究：用MTT法篩選SV

3、P對輻射后早期造血細胞(K562細胞)有促增殖作用的組分，并確定其有效濃度，作為體外實驗中SVP的使用濃度； 2．SVP對輻射損傷小鼠骨髓造血干/祖細胞集落形成的影響。選用雄性BALB/c小鼠，分體外實驗和體內實驗。 體外實驗：將小鼠用6.0 Gy X射線一次性全身照射，于照射后第5、10、15和30天取其骨髓細胞，用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓混合集落(CFU-Mix)，分別加入SVPⅣ、SVPⅤ、細胞因子、SVPⅣ

4、+細胞因子、SVPⅤ+細胞因子，觀察在體外對照射后不同時間SVPⅣ、SVPⅤ以及SVPⅣ和SVPⅤ與細胞因子聯(lián)合應用對骨髓細胞CFU-Mix生成的影響。 體內實驗：小鼠被隨機分為三組：生理鹽水對照組、SVPⅣ組(0.4mg/kg，半數(shù)致死量的1/10)和SVPV組(0.2mg/kg，半數(shù)致死量的1/20)。各組連續(xù)10天腹腔注射生理鹽水及蝎毒多肽，并在給藥后第4天給予亞致死量X射線一次性全身照射，總劑量為6.0 Gy。內源性脾結

5、節(jié)法觀察照射后第10天脾集落形成單位(CFU-S)的變化；用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓細胞CFU-Mix，觀察SVP對照射后不同時間CFU-Mix生成的影響。 3．SVP對輻射損傷小鼠骨髓細胞因子受體表達的影響：小鼠被隨機分為三組：生理鹽水對照組、SVPⅣ組(0.4mg/kg)和SVPⅤ組(0.2mg/kg)。各組連續(xù)10天腹腔注射生理鹽水及蝎毒多肽，并在給藥后第4天給予亞致死量X射線一次性全身照射，總劑量為6.0 Gy。在

6、照射后第5、10、15、30天取小鼠胸骨，采用免疫組化、組織芯片等方法檢測胸骨骨髓細胞中C-KIT和IL-6Ra表達情況。 4．SVP組分對磷酸化STAT3蛋白表達的影響：取正常BALB/c小鼠骨髓細胞，體外分別加入SVPⅣ和SVPⅤ，作用不同時間后提取細胞內總蛋白，用Western blotting方法檢測JAK-STAT信號轉導途徑中磷酸化STAT3蛋白的表達水平。 結論： 1．SVPⅣ可以促進照射后造血早期

7、細胞(K562細胞)增殖，其中30mg/L濃度的作用最為顯著。 2．SVPⅣ和SVP Ⅴ在體外均能夠促進小鼠骨髓混合集落CFU-Mix的形成，二者與細胞因子聯(lián)合應用可以協(xié)同促進CFU-Mix的生長，其中SVPⅣ的作用效果更加明顯。體內注射SVPⅣ可以顯著促進小鼠脾集落形成單位(CFU-S)的形成，SVPⅣ和SVPⅤ在照射后早期即發(fā)揮促進CFU-Mix集落生長的作用。 3．SVPⅣ和SVPⅤ對正常小鼠骨髓細胞磷酸化STAT