PCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)在SLC25A13基因突變檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:建立PCR-反向斑點(diǎn)雜交檢測(cè)SLC25A13基因突變Ⅰ、突變Ⅲ和突變X技術(shù)。 方法: 1．設(shè)計(jì)與合成SLC25A13基因突變Ⅰ、Ⅲ、X寡核苷酸探針。 2．選擇不同濃度探針、不同雜交溫度和不同洗膜溫度進(jìn)行雜交檢測(cè)，探索最佳雜交條件。 3．應(yīng)用已建立的反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)已知基因突變和未知基因突變患兒，并進(jìn)行測(cè)序分析，觀察兩種檢測(cè)方法的結(jié)果符合率。 結(jié)果: 1．0．45μm孔徑尼龍膜、1

2、5-20pmol/μL探針濃度、42．5℃雜交溫度、42．5℃洗膜溫度雜交結(jié)果最理想。 2．100例已知突變組患兒用PCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢出突變Ⅰ純合子17例、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅹ復(fù)合雜合子各1例，Ⅰ/Ⅹ復(fù)合雜合子2例，單條等位基因攜帶突變Ⅰ44例，單條等位基因攜帶突變Ⅲ和單條等位基因攜帶突變Ⅹ1例1人，與PCR-DNA直接測(cè)序法檢出結(jié)果一致，符合率100％。 3．50例未知突變組中，用PCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)共檢出突變Ⅰ

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