核因子κB與妊娠糖尿病大鼠子宮內(nèi)膜胰島素抵抗關(guān)系的研究.pdf

1、妊娠糖尿病(GDM)是指在妊娠期間出現(xiàn)或者首次被發(fā)現(xiàn)的糖耐受不良，它是圍生期一種常見(jiàn)的并發(fā)癥，發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。GDM的發(fā)生對(duì)母親和胎兒的健康有嚴(yán)重的危害，孕期母親糖代謝異常可影響胎兒著床及發(fā)育，引起自然流產(chǎn)率較正常妊娠增加。胰島素抵抗(IR)是GDM的病理學(xué)基礎(chǔ)，對(duì)GDM的發(fā)生發(fā)展起關(guān)鍵作用。
　　核因子-κB(NF-κB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于細(xì)胞中，它參與了細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)調(diào)控，在機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥

2、反應(yīng)和細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育等方面都發(fā)揮著重要的作用。炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、氧化應(yīng)激、游離脂肪酸(FFA)等均能激活NF-κΒ。NF-κB可通過(guò)影響胰島素通路的關(guān)鍵分子干擾胰島素信號(hào)的傳遞，進(jìn)而導(dǎo)致IR的發(fā)生。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(GLUT-4)是胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵分子，主要負(fù)責(zé)機(jī)體各類細(xì)胞的基礎(chǔ)糖需求。GLUT-4蛋白表達(dá)的下調(diào)能夠?qū)е陆M織對(duì)胰島素敏感性降低，進(jìn)而引起IR。子宮是女性生殖功能的基本單位，也是機(jī)體能量代謝

3、活躍的器官。子宮內(nèi)膜含有介導(dǎo)胰島素作用的所有信號(hào)蛋白和代謝酶，在胰島素的刺激下，子宮內(nèi)膜組織攝取并利用葡萄糖，進(jìn)而為子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)和分化提供能量保證。孕期子宮內(nèi)膜對(duì)葡萄糖的攝取及利用又為胎兒的正常發(fā)育提供保證。
　　目的：
　　(1)構(gòu)建GDM大鼠模型，觀察GDM對(duì)大鼠胚胎著床與流產(chǎn)情況的影響。
　　(2)研究GDM大鼠子宮內(nèi)膜組織中TNF-α、FFA、NF-κB、GLUT-4的表達(dá)變化，并應(yīng)用NF-κB抑制劑四氫化吡

4、咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)進(jìn)行干預(yù)，觀察抑制NF-κB以后，大鼠子宮內(nèi)膜組織中GLUT-4表達(dá)的變化。
　　(3)探討NF-κB、GLUT-4在GDM大鼠子宮內(nèi)膜IR發(fā)病及發(fā)展過(guò)程中的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)30只SD孕鼠隨機(jī)分為正常妊娠對(duì)照(NC)組、妊娠糖尿病(GDM)組和PDTC干預(yù)組，每組10只。采用腹腔注射鏈脲霉素(STZ)建立大鼠GDM的模型。PDTC干預(yù)組大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC

5、(40mg/kg)。檢測(cè)大鼠藥物注射前，用藥3d后(妊娠4d)和妊娠20d時(shí)體重、血糖的變化。將大鼠于分娩前即妊娠20d處死，分離出子宮并計(jì)數(shù)大鼠胚胎著床與流產(chǎn)情況。
　　(2)應(yīng)用HE染色觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)改變。
　　(3)應(yīng)用ELISA法測(cè)定各組大鼠子宮內(nèi)膜勻漿中TNF-a含量的變化，比色法測(cè)定各組大鼠子宮內(nèi)膜勻漿中FFA的含量變化。
　　(4)應(yīng)用免疫組化，westernblot檢測(cè)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織

6、NF-κB，GLUT-4的表達(dá)變化，用RT-PCR檢測(cè)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織GLUT-4mRNA的表達(dá)變化，并做相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　(1)三組大鼠體重均有增長(zhǎng)，但GDM組和PDTC干預(yù)組在妊娠4d及妊娠20d時(shí)體重均低于NC組(P<0.01)。GDM組和PDTC干預(yù)組大鼠注射STZ3d后即妊娠4d時(shí)和妊娠20d時(shí)血糖較NC組均明顯升高(P<0.01)。GDM組與NC組相比，胚胎著床數(shù)下降(P<0.01)，流產(chǎn)數(shù)增高(

7、P<0.01)。PDTC干預(yù)組胚胎著床數(shù)比GDM組有所增加(P<0.01)。
　　(2)與NC組相比，GDM組大鼠子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目減少，腺體多為單個(gè)分散排列，腺腔小而直，腺上皮未見(jiàn)分泌泡，部分間質(zhì)水腫，有細(xì)胞壞死脫離現(xiàn)象。PDTC干預(yù)組大鼠子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目較GDM組相對(duì)增多，腺腔增大，但腺體仍多為單個(gè)分散排列，但未見(jiàn)間質(zhì)水腫、細(xì)胞壞死現(xiàn)象。
　　(3)與NC組相比，GDM組和PDTC干預(yù)組大鼠子宮內(nèi)膜組織勻漿中TNF-a、F

8、FA的表達(dá)水平均增加(P<0.01)。
　　(4)與NC組相比，GDM組大鼠子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01)，GLUT-4的蛋白表達(dá)明顯減少(P<0.01)。與GDM組相比，PDTC干預(yù)組大鼠子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的表達(dá)明顯減少(P<0.01)，GLUT-4蛋白的表達(dá)明顯增加(P<0.01)。與NC組相比，GDM組GLUT-4mRNA含量下降(P<0.01)，PDTC干預(yù)組較GDM組GLUT-4mRNA

9、的含量增加(P<0.01)。TNF-a、FFA與NF-κB的蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)(P<0.01)；NF-κB與GLUT-4蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1)本研究通過(guò)腹腔注射STZ構(gòu)建大鼠GDM模型，注射STZ后大鼠體重減輕，空腹血糖升高并能維持高血糖至妊娠結(jié)束，表明該大鼠模型構(gòu)建成功。
　　(2)GDM組大鼠子宮內(nèi)膜TNF-a、FFA的表達(dá)增加，且TNF-a、FFA與NF-κB的蛋白表達(dá)均呈正相

10、關(guān)，說(shuō)明TNF-a、FFA在GDM的高表達(dá)可活化NF-κB，從而使NF-κB在GDM組表達(dá)增加。
　　(3)GDM組GLUT-4的表達(dá)減少，用NF-κB抑制劑PDTC干預(yù)后，GDM組子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的表達(dá)下調(diào)，GLUT-4的表達(dá)上調(diào)，且NF-κB和GLUT-4的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，推測(cè)NF-κB可通過(guò)調(diào)節(jié)GLUT-4這一胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵分子的表達(dá)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜代謝紊亂造成子宮內(nèi)膜IR，說(shuō)明NF-κB和GLUT-4參與了GDM