胃癌血管特異性短肽GEBP11受體信息的初步篩選.pdf

1、【背景】
　　腫瘤的血管生成與腫瘤的生長、侵襲、轉移和預后有著密切的聯(lián)系。對腫瘤血管生成的研究為腫瘤的診斷和治療提供了新的策略和良好前景。然而，由于缺乏腫瘤血管靶向性分子，通過腫瘤血管診斷治療腫瘤尚未取得令人滿意的結果。研究證實，在腫瘤微環(huán)境的作用下腫瘤血管內(nèi)皮細胞的遺傳組成受到影響，表達異質性分子[1,2]。異質性分子的存在將為腫瘤的靶向診斷及治療提供特異性靶標。腫瘤血管的異質性取決于腫瘤的異質性，由腫瘤的類型及微環(huán)境決定[3,

2、4]。胃癌細胞與血管內(nèi)皮細胞的體外共培養(yǎng)可以模擬腫瘤微環(huán)境，誘導胃癌血管異質性分子的表達。前期工作中，我們通過建立胃癌細胞SGC7901和人臍靜脈內(nèi)皮細胞的體外共培養(yǎng)模型，利用噬菌體隨機環(huán)七肽庫體外篩選獲得能特異結合于共培養(yǎng)內(nèi)皮細胞的短肽GEBP11。通過初步鑒定證實，GEBP11具有良好的胃癌血管靶向性[5]和血管生成抑制活性。篩選GEBP11的結合受體對深入研究GEBP11實現(xiàn)靶向性和血管抑制活性的機制具有重要意義。因此，本課題圍繞

3、篩選GEBP11結合受體的相關信息展開研究，旨在為獲得GEBP11的結合受體奠定堅實的基礎。
　　【目的】
　　1.獲得GEBP11結合受體在多種胃癌細胞系、多種正常組織和多種器官腫瘤組織血管的表達分布信息；
　　2.研究GEBP11干預后Co-HUVECs分子群的表達變化，鑒定GEBP11影響的信號通路，為受體篩選提供參考信息；
　　3.篩選GEBP11的結合受體，為闡明GEBP11的機制和功能奠定基礎。

4、>　　【方法】
　　1.通過免疫組織化學染色的方法檢測GEBP11在多種正常組織、多器官腫瘤組織血管上的結合特性，通過免疫細胞化學染色的方法檢測GEBP11在不同胃癌細胞系上的結合特性；
　　2.通過RT-PCR和Westernblot對基因表達譜分析的結果進行驗證，并對基因表達譜分析的結果進行深入的生物信息學分析，鑒定GEBP11影響的信號通路；
　　3.通過免疫沉淀和質譜分析的方法初步篩選GEBP11的受體。

5、>　　【結果】
　　1.GEBP11受體的分布信息
　　1)GEBP11結合受體在多種細胞系上的表達分布
　　免疫細胞化學染色結果顯示，GEBP11在Co-HUVECs和MKN45染色呈陽性，在GES染色弱陽性，在MKN28、AGS、SGC7901染色呈陰性；URP、PBS對照在各細胞系染色均呈陰性。
　　2)GEBP11的結合受體在多種器官腫瘤中的表達分布
　　GEBP11在多器官腫瘤組織的免疫化學染色顯

6、示，GEBP11的結合受體在胃癌、胰腺癌組織血管呈強陽性表達；在食管癌、結腸癌、肝細胞肝癌、子宮癌組織血管呈弱陽性表達；在直腸癌、肺癌、膀胱癌組織血管呈陰性表達。上述9種腫瘤對應的癌旁組織中，GEBP11的結合受體在子宮癌和膀胱癌的癌旁組織血管呈陽性表達；其余均為陰性表達。GEBP11的結合受體在肝細胞肝癌、膀胱尿路上皮癌組織呈陽性表達，在慢性結腸粘膜炎和慢性直腸粘膜炎的腺體、腎組織、膀胱粘膜等癌旁組織中呈陽性表達，在其余腫瘤和癌旁組織

7、實質呈陰性表達。
　　3)GEBP11的結合受體在正常組織中的表達分布
　　GEBP11在食管、肝、胰腺、垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、心肌、肺、腎、胸腺、骨髓、脾臟、乳腺、卵巢、扁桃體、睪丸、前列腺、涎腺、胃、小腸、結腸等各種正常組織血管染色均為陰性，在食管粘膜細胞、胃腺體、結腸腺體、腎小管、睪丸實質染色陽性。
　　2.GEBP11干預后Co-HUVECs表達變化的分子群和影響的信號通路
　　經(jīng)驗證，RT-PCR與W

8、esternblot的結果與基因表達譜一致；差異基因篩選、GoTerm和Pathway分析為GEBP11結合受體的篩選提供了信息。
　　3.GEBP11受體的篩選
　　通過免疫沉淀-質譜分析的方法篩選獲得了12個GEBP11結合受體的候選分子；通過與基因表達譜結果結合分析發(fā)現(xiàn)候選蛋白ZCCHC11經(jīng)GEBP11處理后表達上調約3倍。
　　【結論】
　　1.GEBP11的受體表達于一些低分化胃癌細胞系和某些腫瘤組織