豬精液冷凍保存技術(shù)研究——維生素E、大豆卵磷脂和海藻糖對(duì)豬精液冷凍保存影響.pdf

1、豬精液冷凍技術(shù)在豬育種、豬種質(zhì)資源的保護(hù)等方面有重要現(xiàn)實(shí)意義。一方面，可以使一些優(yōu)秀地方品種種質(zhì)資源以精子庫(kù)的形式得到無(wú)限期保護(hù)，為將來(lái)的豬品種培育提供育種材料；另一方面，豬的冷凍精液使人工授精技術(shù)不再受時(shí)間、地域限制，便于開(kāi)展國(guó)內(nèi)、國(guó)際間種質(zhì)資源交流，提高優(yōu)良種豬的利用率；同時(shí)，豬冷凍精液還可為豬品種培育過(guò)程中獲得穩(wěn)定遺傳育種進(jìn)展和生物安全提供保障。但由于豬精子的生物學(xué)特性，豬精子在冷凍-解凍過(guò)程中更容易受到損傷，與常溫保存精液人工授

2、精效果比較仍有很大差距，而且豬精液的射精量大，不能采用類(lèi)似牛冷凍精液制作方法。目前，國(guó)際上關(guān)于豬冷凍精液的研究仍處于試驗(yàn)研究階段。 本論文研究?jī)?nèi)容主要有以下三方面內(nèi)容。 試驗(yàn)一維生素E(VE)被認(rèn)為是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)外較好的抗氧化劑，許多研究表明，對(duì)牛、羊和豬等家畜的精液冷凍有明顯效果，有報(bào)道認(rèn)為VE與硒和維生素C等均存在互作效應(yīng)，結(jié)合使用可以取得比單獨(dú)使用VE更好的效果，目前未見(jiàn)有關(guān)于維生素E與透明質(zhì)酸互作效應(yīng)的相關(guān)報(bào)道。一

3、般認(rèn)為，HA對(duì)精子頂體有很好的保護(hù)作用，能夠抑制冷凍-解凍過(guò)程中的“類(lèi)獲能變化”。本試驗(yàn)通過(guò)兩因素交叉設(shè)計(jì)，研究了維生素E(VE)、透明質(zhì)酸(HA)及二者間互作效應(yīng)對(duì)豬精液冷凍保存的影響。結(jié)果表明，在冷凍保存液中添加VE或HA均能顯著提高豬精液凍后活率和頂體完整率(P＜0.05)。VE添加水平為600μg/mL時(shí)，活率和頂體完整率分別為42.67％和44.83％，顯著優(yōu)于其它添加水平及對(duì)照組(P＜0.05)；HA添加水平為800μg/m

4、L時(shí)，其精子活率和頂體完整率分別為41.50％和42.67％，和其它添加水平及對(duì)照組均存在明顯差異(P＜0.05)；VE和HA存在極顯著的互作效應(yīng)(P＜0.01)，效果較好的配伍為VE600μg/mL和HA400μg/mL，其活率和頂體完整率分別為43.33％和51.50％； 試驗(yàn)二如何提高生物安全性對(duì)家畜精液冷凍研究和應(yīng)用至關(guān)重要。大豆卵磷脂作為一種植物提取物，具有類(lèi)似卵黃中具有抗低溫打擊保護(hù)能力的主要功能性成份，愈來(lái)愈受到相

5、關(guān)研究者的關(guān)注。國(guó)外有報(bào)道已開(kāi)發(fā)出含大豆卵磷脂的牛精液冷凍保存液配方，國(guó)內(nèi)在羊上也有報(bào)道。本試驗(yàn)以卵黃添加組和低密度脂蛋白(LDL)組作對(duì)照，研究了大豆卵磷脂替代卵黃對(duì)豬精液冷凍保存的影響。結(jié)果表明，添加6％大豆卵磷脂可明顯提高豬精液冷凍效果，其解凍后活率、質(zhì)膜完整率和項(xiàng)體完整率分別為44.33％，45.32％和61.95％，顯著優(yōu)于卵黃對(duì)照組和其它大豆卵磷脂添加水平(P＜0.05)，但效果卻低于9％的低密度脂蛋白(LDL)(P＜0.0

6、1)； 試驗(yàn)三含有大量海藻糖的一些微生物、低溫休眠脊椎動(dòng)物表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗低溫保護(hù)作用，海藻糖已被廣泛應(yīng)用在精子等細(xì)胞冷凍保存。一些研究揭示對(duì)幾種動(dòng)物精子的冷凍效果均有一定提高，但都沒(méi)有達(dá)到預(yù)期效果。EDTA常作為螯合劑用在各種動(dòng)物精液的常溫和冷凍保存中，與溶液中Ca2+離子發(fā)生螯合反應(yīng)，減少冷凍過(guò)程中“類(lèi)獲能”對(duì)精子的危害。有報(bào)道在羊精液冷凍中，海藻糖與EDTA結(jié)合使用取得較好效果，但在豬精液冷凍中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)研究了海藻

7、糖和兩個(gè)添加水平的EDTA對(duì)豬精液冷凍保存的影響。結(jié)果表明，添加0.035g/mL海藻糖可明顯提高豬精液冷凍保存效果(P＜0.05)。與對(duì)照組相比較，添加1.0g/L的EDTA明顯降低了凍后精子活率(P＜0.05)，但明顯提高了凍后精子頂體完整率(P＜0.05)。0.035g/mL海藻糖與1.0g/L的EDTA間存在互作效應(yīng)(P＜0.05)，其凍后精子活率、質(zhì)膜完整率和頂體完整率分別為44.67％，43.50％和64.33％，明顯優(yōu)于對(duì)