Rab23在皮膚鱗狀細胞癌侵襲中的作用及機制研究.pdf

1、皮膚鱗狀細胞癌（cutaneoussquamouscellcarcinoma,cSCC）是皮膚的第二常見腫瘤，發(fā)生率僅次于基底細胞癌（basalcellcarcinoma,BCC）。它是一種侵襲性癌，可早期轉(zhuǎn)移。因此，關(guān)于鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展及其侵襲、轉(zhuǎn)移的研究一直是皮膚科學界關(guān)注的重點領域之一。
　　Rab23是RAS原癌基因成員，其編碼的蛋白是小GTP酶超家族Rab家族成員，其突變可引起小鼠開腦綜合征（openbrainsyn

2、drome）。它參與囊泡轉(zhuǎn)運，是sonichedgehog信號通路的負調(diào)控因子，并在不同腫瘤中發(fā)揮不同作用。課題組曾發(fā)現(xiàn)Rab23在皮膚鱗癌中高表達，但目前尚未見Rab23在皮膚鱗癌侵襲中的作用及機制的研究。本研究通過免疫組化檢測Rab23在光線性角化病、鮑溫病、皮膚鱗癌和正常皮膚中的表達，分析其與鱗癌侵襲的相關(guān)性，檢測Rab23在鱗癌細胞系中的表達，研究Rab23對鱗癌細胞侵襲的影響，并初步探討機制。
　　實驗方法：
　　

3、①免疫組化檢測Rab23在光線性角化病、鮑溫病、皮膚鱗狀細胞癌及正常皮膚中的表達，統(tǒng)計分析Rab23在各組中的表達差異，及Rab23陽性表達與皮膚鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性；②Westernblotting檢測Rab23在HSC-2、HSQ-89、Sa-3、Tca四個鱗癌細胞系及Hacat中的表達；③Transwell小室檢測Rab23對鱗癌細胞侵襲能力的影響；④細胞劃痕試驗檢測Rab23對鱗癌細胞遷移能力的影響；⑤RealtimeRT-

4、PCR檢測干涉或過表達Rab23后鱗癌細胞中侵襲相關(guān)分子MMP2、MMP9，hedgehog信號通路中Ptch1、Gli1、Gli2的mRNA水平；⑥Westernblotting檢測侵襲相關(guān)分子Rac1的表達。
　　實驗結(jié)果：
　?、賀ab23在皮膚鱗狀細胞癌、光線性角化病、鮑溫病及正常皮膚中的表達：Rab23在光線性角化病、鮑溫病及皮膚鱗狀細胞癌組織中均有表達，在正常皮膚中不表達，非曝光部位及中、低分化鱗癌是Rab23陽

5、性表達的危險因素；
　　②Rab23在HSC-2、HSQ-89、Sa-3、Tca四個鱗癌細胞系及Hacat中的表達：Rab23在四個鱗癌細胞系中均有表達，在HSC-2、HSQ-89細胞中高表達，在Sa-3及Tca中低表達，在Hacat中不表達；
　?、跿ranswell小室檢測Rab23對鱗癌細胞侵襲能力的影響：HSQ-89細胞行Rab23特異的siRNA干涉后，細胞侵襲能力減弱；Sa-3細胞行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達Rab23后，細

6、胞侵襲能力較對照組增強；
　?、芗毎麆澓墼囼灆z測Rab23對鱗癌細胞遷移能力的影響：HSQ-89細胞行siRNA干涉后，干涉組與對照組細胞均僅遷移1個細胞直徑距離；Sa-3細胞行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，過表達組與對照組細胞遷移能力差異無統(tǒng)計學意義；
　?、軷ealtimeRT-PCR檢測干涉或過表達Rab23后相關(guān)分子的水平：HSQ-89細胞Rab23干涉組MMP2、MMP9、Gli2的mRNA水平較對照組低，Ptch1、Gli1的mR

7、NA水平較對照組高；Sa-3細胞Rab23過表達組中MMP2、MMP9、Gli2的mRNA水平較對照組高，Ptch1、Gli1較對照組低；
　?、轜esternblotting檢測干涉或過表達Rab23后Rac1的表達：HSQ-89細胞干涉Rab23表達后，Rac1水平較對照組低；Sa-3細胞過表達Rab23表達后，Rac1水平較對照組高。
　　主要結(jié)論：
　?、賀ab23在光線性角化病、鮑溫病及皮膚鱗癌中陽性表達，而