丹參素、芍藥苷對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷保護作用的研究.pdf

1、目的 制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，觀察中藥丹參有效成分中藥單體丹參素、芍藥有效成分中藥單體芍藥苷對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用，并探討其作用機制。以期為臨床尋找新的有效治療新生兒缺氧缺血性病(HIE)的藥物提供實驗理論依據。 方法 1結扎新生大鼠左頸總動脈，放入缺氧裝置箱，吸入92％氮氣及8％氧氣混合氣，制備新生大鼠HIBD模型。假手術組僅切開頸部皮膚，分離左頸總動脈，不結扎動脈及不吸入低氧

2、混合氣。 2 將7日齡新生大鼠隨機分成2組：①假手術組(Sham)；②缺氧缺血模型組(HIBD)。缺氧缺血后48h多聚甲醛心臟灌注，斷頭取腦，多聚甲醛固定，石蠟包埋。HE染色觀察腦組織病理改變及脫氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端標記法(TUNEL)染色檢測神經細胞凋亡。 3 將7日齡新生大鼠隨機分成5組：①假手術組(Sham+Veh)，假手術后Oh腹腔注射等量生理鹽水；②缺氧缺血模型組(HIBD+Veh)，缺氧缺血后0、24h

3、腹腔注射等量生理鹽水；③丹參素15mg/Kg.d，治療組(HIBD+DSS 15mg·Kg<'-1>·d<'-1>)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射丹參素15mg/Kg.d；④丹參素30 mg·Kg<'-1>·d<'-1>治療組(HIBD+DSS 30mg/Kg.d)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射丹參素30mg/Kg.d；⑤丹參素60 mg/Kg.d治療組(HIBD9+DSS 60mg·Kg<'-1>·d<'-1>)，缺氧缺血后0、24h

4、腹腔注射丹參素60mg/Kg.dHIBD+Veh組與各丹參素治療組再分為3個時點，即再分為缺氧缺血后6h、24h、48h亞組，每亞組6只大鼠。 4 Sham+Veh組新生大鼠于假手術后6h，HIBDq+Veh及各HIBD+DSS組分別于缺氧缺血(HI)6h、24h、48h斷頭取腦。制備腦勻漿，比色法黃嘌呤氧化酶法測定鼠腦勻漿SOD活性，改良的硫代巴比妥酸法(TBA法)測定MDA濃度水平，比色法測定NOS、iNOS活性，硝酸還原酶

5、法測定NO濃度水平。 5 Sham+Yeh組新生大鼠于假手術后48h，HIBD+Veh及各HIBD+DSS組于缺氧缺血后48h多聚甲醛心臟灌注，斷頭取腦，多聚甲醛固定，石蠟包埋。HE染色觀察腦組織病理改變及脫氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端標記法(TIJNEL)染色檢測神經細胞凋亡。 6 應用以上方法行芍藥苷實驗，將7日齡新生大鼠隨機分為假手術組(Sham+Veh)、缺氧缺血模型組(HIBD+Veh)，芍藥苷5mg/Kg.d治

6、療組(HIBD+PF5mg/Kg.d)，芍藥苷10 mg/Kg.d治療組(HIBD+PF 10mg/Kg.d)，芍藥苷20 mg/Kg.d治療組(HIBD+PF 20mg/Kg.d)。芍藥昔劑為5mg/Kg、10mg/Kg、20mg/Kg，每天一次。 結果 1新生大鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織的病理改變與腦細胞凋亡觀察 Sham組大腦皮質及海馬區(qū)組織無水腫、壞死，神經細胞形態(tài)正常，未出現Tunel陽性凋亡細胞。與Sha

7、m組比較，HIBD組新生大鼠大腦皮層及海馬區(qū)組織水腫，細胞周圍間隙增寬，胞體腫脹變圓，變大，胞漿染色變淺；Tunel染色陽性凋亡細胞較多。 2 結扎新生大鼠左頸總動脈并在缺氧條件下腦組織生化指標的改變 1．1 與Sham+Veh組比較，HIBD+Veh組新生大鼠經缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大腦組織中SOD活性降低，MDA水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 1．2 與sham+Veh組比較，HI

8、BD+Veh組新生大鼠大腦中iNOS在缺氧缺血后6h時變化不大，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h時升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 1．3 與Sham+’Veh組比較，HIBD+Veh組NOS及NO在缺氧缺血后6h、24h、48h均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2 丹參素對新生鼠缺氧缺血性腦損傷具有保護作用 2．1各劑量HIBD+DSS組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h

9、、24h、48h，大腦組織中SOD活性較HIBD+Veh組相應時點回升，MDA水平回降，且呈一定的劑量效應。差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2．2各劑量HIBD+DSS組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h時，大腦組織中iNOS較HIBD+Veh組相應時點變化不大，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h時，各劑量HIBD+DSS組新生大鼠大腦組織中iNOS較HIBD+Veh組相應時點回降，且呈現一定的量效關系，

10、差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2．3各劑量HIBD+DSS組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大腦組織中NOS、NO較HIBD+Veh組相應時點回降，且呈現一定的量效關系，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2．4與HIBD+Veh組比較，各劑量HIBD+DSS組新生大鼠病理損傷減輕，凋亡細胞減少，且呈一定的劑量效應，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3 芍藥苷對新生鼠缺氧缺血性腦損傷具有保護

11、作用 3．1 各劑量HIBD+PF組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大腦組織中SOD活性較HIBD+Veh組相應時點回升，MDA水平水平回降，且呈一定的劑量效應。差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3．2 各劑量HIBD+PF組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h時，大腦組織中iNOS較HIBD+Veh組相應時點變化不大，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h，時各劑量HIBD+PF組新生大鼠

12、大腦組織中iNOS較HIBD+Veh組相應時點回降，且呈現一定的量效關系，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3．3 各劑量HIBD+PF組新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大腦組織中NOS、NO較HIBD+Veh組相應時點回降，且呈現一定的量效關系，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3．4 各劑量HIBD+PF組新生大鼠與HIBD+Veh組比較病理損傷減輕，凋亡細胞減少，且呈一定的劑量效應，差異有統(tǒng)計學意

13、義(P<0.05)。 結論 1缺氧缺血可導致新生大鼠以腦細胞凋亡為形態(tài)學特征的腦損傷。其可能機制為缺氧缺血導致新生大鼠缺氧缺血早期腦nNOS產生增多，缺氧缺血后期腦iNOS產生增多，兩者產生的過高的NO有促腦細胞凋亡，從而起損害腦的作用；另外新生大鼠缺氧缺血后氧自由基損傷及脂質過氧化可能也與腦細胞凋亡有關。 2 丹參素具有抑制腦細胞凋亡，從而起腦保護作用。其機制可能與其在缺氧缺血早期抑制nNOS產生，在缺氧缺血后期