EGFR酪氨酸激酶抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及生物活性篩選和類藥性化合物庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、惡性腫瘤作為全球最大的公共衛(wèi)生問題，成為嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病。研究表明，EGFR在多種不同的腫瘤中都存在過渡表達(dá)，其在細(xì)胞的增殖中起著十分重要的作用，因此是極具潛力的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)之一。近些年，針對(duì)EGFR的靶向藥物開發(fā)取得了令人鼓舞的成績(jī)。以EGFR為靶點(diǎn)的第一代EGFR抑制劑Gefitinib、Erlotinib、Icotinib以及第二代EGFR抑制劑Afatinib已經(jīng)被批準(zhǔn)用于臨床治療非小細(xì)胞肺癌。由于腫瘤是一種復(fù)

2、雜的疾病，是由多種遺傳和分子的改變影響了細(xì)胞的增殖、存活和分化的疾病。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)展和從細(xì)胞受體與增生調(diào)控的分子水平對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步深入，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展并不是僅僅依賴于一種受體或一種信號(hào)通路而且信號(hào)通路之間相互交錯(cuò)，單靶點(diǎn)TKI已難以達(dá)到理想的阻斷腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展和對(duì)特定腫瘤的治療，而針對(duì)多靶點(diǎn)抑制劑可能取得更大療效。目前，多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑已經(jīng)成為新的研究趨勢(shì)。其中葛蘭素-史克公司開發(fā)的拉帕替尼是可

3、逆性EGFR和HER2雙重抑制劑，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市，用于治療乳腺癌。由于多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑能作用于多個(gè)靶點(diǎn)，相對(duì)于兩個(gè)單靶點(diǎn)藥物的聯(lián)合應(yīng)用，可以避免藥物的相互作用，減少副反應(yīng)，治療效率高，安全性好，病人依從性好。
　　本文對(duì)臨床上的小分子受體酪氨酸激酶抑制劑的構(gòu)效關(guān)系以及文獻(xiàn)報(bào)道的配體-受體結(jié)合模型進(jìn)行綜述，同時(shí)也對(duì)近些年文獻(xiàn)報(bào)道的鐵離子螯合劑的抗腫瘤活性進(jìn)展進(jìn)行了綜述。在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)合成了兩類含含3-羥基-4-吡啶酮

4、片段的4-芳胺基喹唑啉類衍生物。該部分工作的創(chuàng)新點(diǎn)是在傳統(tǒng)的喹唑啉母核的7-位或者6-位引入了3-羥基-4-吡啶酮片段。而3-羥基-4-吡啶酮片段是一類已知的鐵離子螯合片段，有望開發(fā)出一類結(jié)構(gòu)新穎并且擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑，所有合成的目標(biāo)化合物均經(jīng)過了1H NMR、HPLC-HRMS和熔點(diǎn)表征。對(duì)所設(shè)計(jì)的化合物進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞篩選，發(fā)現(xiàn)大部分化合物對(duì)EGFR高表達(dá)的人表皮癌細(xì)胞株A431WT, overexpres

5、sion有較好的增殖抑制活性;所設(shè)計(jì)的化合物對(duì)Gefitinib耐藥的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1975L858R/T790M也有一定的增殖抑制活性。我們進(jìn)一步考察了所設(shè)計(jì)的化合物在人宮頸癌Hela細(xì)胞株上的活性，發(fā)現(xiàn)化合物都有較好的增殖抑制活性。我們從中選取部分化合物進(jìn)行激酶活性考察，發(fā)現(xiàn)化合物EGFRWT激酶、突變型EGFRL858R激酶同樣表現(xiàn)出較好的抑制活性，但是在突變型EGFRT790M激酶上的抑制活性較弱。此外，我們選取的苗頭化

6、合物在EGFR低表達(dá)的細(xì)胞株SW620上增殖抑制活性較差。體外Cysteine捕獲實(shí)驗(yàn)和Western Blotting洗脫實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了該類化合物不能與Cysteine發(fā)生共價(jià)結(jié)合。這樣的結(jié)果預(yù)示著該類化合物為可逆型多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑。所合成的化合物后續(xù)成藥性評(píng)價(jià)也正在進(jìn)行中。化合物庫(kù)的高通量篩選依然是新藥發(fā)現(xiàn)的主要途徑之一，含氮雜環(huán)在已上市的藥物中占有很大的比例，因此數(shù)量巨大的含氮雜環(huán)化合物庫(kù)對(duì)于發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物具有極其重要的意

7、義。論文第三部分，利用常規(guī)化學(xué)方法和新的化學(xué)方法構(gòu)建了8類共計(jì)655個(gè)結(jié)構(gòu)全新的化合物。其中對(duì)于噻唑類衍生化合物庫(kù)和含鐵離子螯合片段的芳基脲類衍生物化合物庫(kù)，我們對(duì)其進(jìn)行了對(duì)應(yīng)的體外腫瘤細(xì)胞活性篩選。發(fā)現(xiàn)了先導(dǎo)化合物。對(duì)于多取代苯胺類化合物庫(kù)和2-氨基咪唑類化合物庫(kù)，我們開發(fā)出新的化學(xué)合成方法。對(duì)含糖片段的鐵離子螯合劑化合物庫(kù)，我們?cè)敿?xì)考察了其與鐵離子的親和能力以及透過血腦屏障的能力。在本論文中，我們選取其中四個(gè)化合物庫(kù)進(jìn)行介紹。8個(gè)化