微囊蛋白在小鼠膽囊膽固醇結石癥形成中的作用.pdf

1、目的:研究微囊蛋白在致石飼料誘導的小鼠膽囊膽固醇結石癥形成中的作用，為臨床膽囊膽固醇結石癥的診療提供新的思路。
　　方法:以結石易感小鼠C57BL/6小鼠為研究對象，分別給予普通飼料和含高脂高膽固醇致石飼料飼養(yǎng)4周。4％水合氯醛腹腔注射，待小鼠麻醉后，進行小鼠外科實驗。依次剪開皮膚、皮下筋膜、腹膜，充分暴露肝膽組織，肉眼觀察小鼠肝臟、膽囊外觀及膽囊結石形成情況。結扎膽囊管及膽總管下端，在膽總管插入PE10號管1h留取膽汁-20℃保

2、存。下腔靜脈采血于含EDTA的生化管中，3000rpm4℃離心15min收集上層血清4℃保存。最后切取肝臟和膽囊組織，肝臟稱重，肝膽組織保存于-80℃冰箱。全自動生化分析儀檢測血脂及膽汁成分。RT-PCR及Westren blot分別檢測小鼠肝臟及膽囊CAV1、CAV3、SR-B1、CCK-AR的基因和蛋白水平。
　　結果:致石飼料飼養(yǎng)4周后，實驗組小鼠膽囊增大，膽囊內(nèi)可見大量泥沙狀膽固醇結石沉積，成石率為100％(6/6)，而普

3、通飼料飼養(yǎng)的對照組小鼠膽囊略小，均未發(fā)現(xiàn)有結石。實驗組小鼠肝體重比顯著增加（0.08±0.01 vs0.05±0.01，P＜0.01），肝臟外觀較灰暗、腫大，而普通飼料飲食的對照組小鼠肝臟色澤紅潤，體積較小。實驗組小鼠膽汁渾濁，膽固醇和磷脂含量較對照組明顯升高（1.33±0.33 vs0.21±0.11，P＜0.01;3.55±1.40 vs1.55±0.63，P＜0.05），而總膽汁酸含量卻顯著下降(726.48±51.83 vs83

4、9.83±23.75，P＜0.01)。實驗組小鼠血清總膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量明顯高于對照組(TC:4.22±0.46 vs2.21±0.11，P＜0.01;HDL:1.86±0.10 vs1.35±0.11，P＜0.01;LDL:2.18±0.44 vs0.58±0.12，P＜0.01)，甘油三酯、極低密度脂蛋白(水平未有明顯改變(TG:0.75±0.04 vs0.83±0.15，VLDL:0.18±0.12 vs0.2

5、8±0.09)。與對照組小鼠相比，實驗組小鼠肝臟和膽囊CAV1mRNA和蛋白表達均顯著下降（肝臟CAV1基因和蛋白分別為0.53±0.13 vs1±0.32，P＜0.01;0.39±0.07 vs0.92±0.06，P＜0.01;膽囊CAV1基因和蛋白分別為0.4±0.22 vs1±0.22，P＜0.01;1.04±0.07 vs1.34±0.04，P＜0.01），膽囊CCKAR基因和蛋白水平亦明顯降低(0.32±0.20 vs1±0.

6、25，P＜0.01;0.07±0.02 vs0.35±0.04，P＜0.01)，兩組小鼠肝臟均未能檢測到CCK-AR的表達。肝臟CAV3 mRNA和蛋白表達增加（肝臟CAV3基因和蛋白分別為3.38±1.47 vs1±0.17，P＜0.01;0.93±0.04 vs0.5±0.06，P＜0.01)，膽囊CAV3 mRNA水平改變沒有統(tǒng)計學意義（0.87±0.27 vs1±0.40），蛋白水平顯著升高（0.25±0.03 vs0.17±0

7、.02，P＜0.05）;SR-B1基因和蛋白均未有明顯改變（肝臟基因和蛋白分別為0.25±0.03 vs0.17±0.02，0.9±0.04 vs0.92±0.04;膽囊基因和蛋白分別為0.86±0.27 vs1±0.35，0.89±0.03 vs1.04±0.07）。
　　結論:含高脂高膽固醇高膽酸的致石餐作為一外界干預因素，能誘導小鼠血脂含量升高，膽道膽固醇高分泌，總膽汁酸合成減少，促使小鼠膽囊膽固醇結石形成。小鼠膽囊膽固醇結

8、石產(chǎn)生伴隨CAV1和CAV3在肝膽組織基因和蛋白表達水平發(fā)生變化，提示CAV1及CAV3可能與膽囊膽固醇結石的形成有關。SR-B1可能對C57BL/6小鼠膽囊膽固醇結石的形成無顯著影響。CAV1在肝膽組織表達下降，可能造成膽固醇轉(zhuǎn)運功能受損，脂質(zhì)代謝紊亂，膽固醇在肝細胞內(nèi)大量堆積。CAV3可能通過抑制膽囊CCKAR的表達，減弱膽囊平滑肌的收縮，膽囊動力低下，膽汁淤滯，促進膽固醇結晶析出，聚集以及結石形成。CAV1、CAV3有望成為臨床膽