胰島素對前列腺癌細胞的作用及機制.pdf

1、目的:
　　建立雄激素非依賴前列腺癌細胞系，觀察胰島素對三種前列腺癌細胞系(LNCaP、LNCaP-AI、PC-3)增殖、活力、遷移與侵襲能力的影響，并探討其可能機制。
　　方法:
　　本研究分為兩部分。(1)去雄激素環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細胞，建立雄激素非依賴前列腺癌細胞系LNCaP-AI;(2)胰島素分別刺激LNCaP、LNCaP-AI、PC-3三種細胞，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-TimeP

2、CR)、蛋白免疫印跡(WesternBlotting)、免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistry,ICC)法檢測胰島素受體表達變化;細胞計數(shù)法、四唑鹽法(MTT)、細胞劃痕試驗、細胞侵襲試驗驗(Transwell)分別檢測細胞接受刺激前后增殖、活力、遷移和侵襲能力的變化;WesternBlotting檢測細胞接受刺激前后Ras、ERK1/2、MEK1/2蛋白的表達變化以觀察MAPK信號通路的活性變化。
　　結(jié)果:

3、>　　(1)6個月后成功建立LNCaP-AI細胞系。該細胞可在去雄環(huán)境下正常成長、傳代、凍存及復(fù)蘇，與LNCaP相比，細胞形態(tài)發(fā)生改變，雄激素受體表達升高，胰島素受體表達無明顯變化;(2)胰島素刺激可使三種細胞的胰島素受體在mRNA及蛋白水平表達均增加;胰島素對LNCaP細胞的增殖、活力、遷移及侵襲均有所抑制，對PC-3細胞有明顯促進作用，而LNCaP-AI細胞在胰島素刺激前后增殖、活力、遷移及侵襲均無明顯變化;胰島素可降低LNCaP細