采用蛋白質組學技術篩選鼻咽癌細胞的甲基化基因.pdf

1、鼻咽癌(NPC)是我國南方地區(qū)常見的一種惡性腫瘤，其發(fā)病機制還不清楚。DNA甲基化修飾是基因表達調控的重要表觀遺傳學機制之一，DNA甲基化修飾導致抑瘤基因等的沉默在癌變過程中發(fā)揮重要的作用。因此，篩選鼻咽癌的甲基化失活基因將有助于揭示鼻咽癌的發(fā)病機制，具有重要的理論和應用價值。 本研究以高轉移的鼻咽癌細胞系5-8F為對象，采用蛋白質組學技術篩選鼻咽癌細胞的甲基化失活基因。首先用MTT比色法和流式細胞儀分析確定去甲基化藥物5-雜氮

2、-2’-脫氧胞苷(5-aza-2-dC)處理5-8F細胞的最適濃度。然后應用雙向凝膠電泳(2-DE)技術分離5-aza-2-dC處理與未處理5-8F細胞的蛋白質；利用PDQuest圖像分析軟件比較兩者2-DE圖譜的異同，識別差異表達的蛋白質點；應用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)鑒定差異表達的蛋白質；采用Western blot和RT-PCR檢測差異蛋白質nm23-H1的表達水平；再采用甲基化特異性PCR(M

3、SP)檢測5-8F細胞中nm23-H1基因的甲基化。主要結果如下： 1.采用蛋白質組學技術建立了5-aza-2-dC處理與未處理鼻咽癌細胞株5-8F細胞蛋白質的2-DE圖譜，識別了49個差異表達的蛋白質點，鑒定了33個差異表達的蛋白質，其中包括nm23-H1在內的15個蛋白質在5-aza-2-dC處理后表達上調，而18個蛋白質表達下調。15個5-aza-2-dC處理后表達上調的基因可能是5.8F細胞中的甲基化沉默基因。

4、2.Western blot結果顯示：在5-aza-2-dC處理5-8F細胞后，nm23-H1蛋白質的表達上調，這與蛋白質組學的研究結果一致。 3.MSP結果顯示，5-aza-2-dC處理5-8F細胞后，nm23-H1基因啟動子甲基化水平降低，而非甲基化水平增加。RT-PCR結果顯示，5-aza-2-dC處理后，nm23-H1基因mRNA的表達明顯上調。結果說明，nm23-H1基因是5-8F細胞中的甲基化沉默基因。 本研