耐甲氧西林金黃色葡萄球菌PVL基因的檢測及與肺炎的關系.pdf

1、本文為了解我院近2年來肺炎患者下呼吸道標本中分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)菌株中攜帶PVL基因的檢出情況，以及這些產PVL毒素菌株對臨床常用抗生素的耐藥情況，同時分析產PVL毒素的MRSA所致肺炎的危險因素和臨床特點，以指導臨床有效地防治產PVL毒素的MRSA所致的肺部感染，因此進行了本課題的研究。 研究材料與方法： 1.MR

2、SA的檢測及藥物敏感試驗受試菌株：2004年7月-2006年3月間中山大學附屬第三醫(yī)院從住院并確診為肺炎患者下呼吸道標本中分離的金黃色葡萄球菌(排除同一患者同一部位重復分離的菌株)。 菌株篩選：凝固酶試驗及瓊脂篩選試驗篩選MRSA。藥物敏感試驗：采用2004年國際臨床實驗室標準委員會(NationalCommiteeforClinicalLaboratoryStandards，NCCLS)認可的紙片擴散法；測定菌株對下列14種抗

3、生素藥物敏感性，包括苯唑西林、青霉素、環(huán)丙沙星、莫西沙星、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、復方新諾明、利福平、慶大霉素、氯霉素、頭孢西丁、夫西地酸、萬古霉素。 2.MRSA-PVL基因的檢測實驗菌株：76株經瓊脂篩選試驗篩選的MRSA菌株作為研究用菌，其中CA-MRSA20株和HA-MRSA56株，均符合診斷標準。 MRSA-DNA的提?。篋NA提取采用丙酮破壁和堿裂解法。 PVL基因引物Luk-PV15’-ATCAT

4、TAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA-3’LuK-PV25’-GCATCAASTGTATTGGATAGCAAAAGC-3’引物參照Lina[54]等報道的核苷酸序列。 PCR擴增PVL基因、產物分析與測序：PVL基因經PCR擴增，擴增片斷長度為433bp。產物采用瓊脂糖凝膠電泳法，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結果并照相后切膠回收純化，用雙脫氧鏈末端終止法測序，結果與GenBank提供的PVL基因核苷酸序列進行對比以確定其基

5、因來源。 3.PVL-MRSA肺炎的危險因素與臨床特點分析病例與資料來源：采用成組病例-對照研究設計，將下呼吸道標本中分離到的PVL基因陽性MRSA肺炎患者全部列為研究對象，定為產PVL組。從同時期下呼吸道標本中分離到的PVL基因陰性MRSA所致的全部肺炎患者中隨機抽取部分病例作對照，定為非產PVL組。查閱患者住院病歷以收集有關資料，包括性別、年齡、基礎疾病、侵襲性操作、霧化吸入、有無應用免疫抑制劑、入住重癥監(jiān)護室、白細胞計數等

6、可能危險因素。同時收集其它一些臨床資料包括有無混合感染、感染后住院天數、感染期間有無發(fā)熱、氣促、咳嗽、咯血、預后等。 統(tǒng)計分析方法：使用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，單因素分析采用計數資料X2檢驗或精確概率計算法。 研究結果： 1.菌種分離和鑒定2004年7月-2006年3月間分離收集的93株金黃色葡萄球菌主要來源于呼吸科和肝移植科。93株金黃色葡萄球菌中，76株為MRSA，占81.7％(76/93)。 2.

7、耐藥情況76株MRSA中，CA-MRSA和HA-MRSA各占26.3％、73.7％。兩者均具有多重耐藥性。兩組對14種抗菌素耐藥率均無明顯差異。76株MRSA還可分為產PVL組及非產PVL組，兩組均對多種抗菌素耐藥。非產PVL組易對四環(huán)素產生耐藥性，產PVL組易對夫西地酸產生耐藥性。兩組均對其余12種抗菌素耐藥率均無明顯差異。76株MRSA均對萬古霉素敏感，沒有發(fā)現中度敏感株和耐藥株。 3.PVL基因的檢出情況76株MRSA中1

8、0株獲得了目的基因片斷，其中CA-MRSA與HA-MRSA各有5株，陽性率分別為25％、8.9％。產物測序結果與基因文庫中AB186917.1相似度達99％。這10株MRSA分離自30-86歲成年人。 4.MRSA-PVL基因與肺炎關系研究10例產PVL組及50例非產PVL組兩組計數資料的單因素分析結果顯示，兩組在發(fā)病年齡、基礎疾病等危險因素方面沒有顯著性差異，而在臨床特征方面，10例產PVL組中出現氣促、低血壓、心率快、咯血比

9、例分別為10/10、4/10、4/10、2/10，并且死亡率高達30％。而50例非產PVL組中出現氣促、低血壓、心率快、咯血比例為9/50、3/50、3/50、1/50，死亡率為6％。10例產PVL組白細胞總數升高不明顯。 研究結論： 1.本院MRSA的耐藥情況比較嚴重，CA-MRSA的耐藥情況也較高。目前，萬古霉素仍是治療MRSA感染，包括攜帶PVL基因的MRSA感染的首選藥物。 2.本院存在攜帶PVL基因的M