小鼠嗅皮層不同類神經(jīng)元功能可塑性在聯(lián)合式學(xué)習(xí)記憶中的作用.pdf

1、目的：建立小鼠聯(lián)合式學(xué)習(xí)記憶的動(dòng)物模型，通過(guò)T迷宮實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證信息提取是否具有互為性，采用電生理實(shí)驗(yàn)方法，研究小鼠嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元內(nèi)在特性和突觸傳遞效應(yīng)的變化。
　　方法：1．條件反射模型的建立：選擇出生后10天的C57BL-6-gfp小鼠，以乙酸丁酯作為氣味源的無(wú)關(guān)刺激，經(jīng)過(guò)訓(xùn)練10天后變?yōu)闂l件刺激，非條件刺激是5Hz的觸須觸覺(jué)刺激，建立小鼠觸須觸覺(jué)和嗅覺(jué)的條件反射動(dòng)物模型。
　　2．行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)分為

2、四組：空白對(duì)照組、嗅覺(jué)訓(xùn)練組、觸覺(jué)訓(xùn)練組、聯(lián)合訓(xùn)練組，應(yīng)用T迷宮檢測(cè)小鼠嗅覺(jué)功能變化，實(shí)驗(yàn)中給予小鼠5Hz的觸須觸覺(jué)刺激，小鼠回避乙酸丁酯的概率作為鑒別其嗅覺(jué)功能上調(diào)的指標(biāo)。
　　3．膜片鉗電生理實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)分為聯(lián)合訓(xùn)練和空白對(duì)照兩組。取模型建立后小鼠和空白對(duì)照組小鼠，用異氟烷吸入麻醉，迅速將大腦分離，做冠狀切片（400μm），然后將腦片置于氧合的人工腦脊液(ASCF)中，25?C下孵育1-2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至灌流槽，31?C下對(duì)腦片進(jìn)行

3、灌流；采用IR-DIC光學(xué)顯微鏡(Nikon E600FN)熒光顯微鏡定位大腦嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元；運(yùn)用Axoclamp-200B放大器，電流鉗和電壓鉗模式全細(xì)胞記錄方法研究小鼠大腦嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和 GABA能神經(jīng)元內(nèi)在特性（ARP；Vts；Vr；Input-Output；ISI）以及神經(jīng)元突觸傳遞效應(yīng)（sEPSC；sIPSC）的變化，數(shù)據(jù)輸入Clampex10.1進(jìn)行處理分析。
　　結(jié)果：1.行為學(xué)結(jié)果：

4、（1）僅受嗅覺(jué)訓(xùn)練的小鼠實(shí)驗(yàn)中回避乙酸丁酯的概率高于空白對(duì)照組(P<0.05)。（2）受觸須觸覺(jué)訓(xùn)練的小鼠實(shí)驗(yàn)中回避乙酸丁酯的概率與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。（3）小鼠在接受觸須-嗅覺(jué)聯(lián)合訓(xùn)練10天后能建立起以乙酸丁酯氣味刺激為條件刺激的條件反射。在給予非條件刺激時(shí)，小鼠回避乙酸丁酯的概率明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01)，且與嗅覺(jué)訓(xùn)練組相比有顯著性差異。
　　2.膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）電流鉗模式實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空

5、白對(duì)照組相比，受觸覺(jué)-嗅覺(jué)聯(lián)合訓(xùn)練的小鼠其谷氨酸能神經(jīng)元群集發(fā)放動(dòng)作電位的發(fā)放容量顯著增加，動(dòng)作電位間距ISI縮短(P<0.05)，閾電位(Vts)降低(P<0.05)，絕對(duì)不應(yīng)期縮短（P<0.05）,
　　單位時(shí)間內(nèi)發(fā)放動(dòng)作電位的個(gè)數(shù)（Input and Output）增加(P<0.05)。GABA能神經(jīng)元的群集發(fā)放動(dòng)作電位的發(fā)放容量顯著降低，動(dòng)作電位間距ISI延長(zhǎng)(P<0.05)，閾電位(Vts)升高(P<0.05)，絕對(duì)不應(yīng)

6、期延長(zhǎng)（P<0.05）,單位時(shí)間內(nèi)發(fā)放動(dòng)作電位的個(gè)數(shù)（Input and Output）減少(P<0.05)（2）電壓鉗模式實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，受觸覺(jué)-嗅覺(jué)聯(lián)合訓(xùn)練的小鼠與空白對(duì)照組相比，谷氨酸能神經(jīng)元的自發(fā)性興奮性突觸后電流sEPSCs的電流間距縮短（P<0.05），電流幅度增加(P<0.05)，自發(fā)性抑制性突觸后電流sIPSCs的電流間距延長(zhǎng)（P<0.05），電流幅度減小(P<0.05)。GABA能神經(jīng)元的自發(fā)性興奮性突觸后電流 sEPS