菊花高效不定芽再生體系建立及品種間RAPD分析.pdf

1、菊花Dendranthema grandiflorum(Ramat) Kitam.原產(chǎn)于中國，是中國十大傳統(tǒng)名花之一，也是世界四大切花之首，總產(chǎn)值排名第一。菊花在我國北方秋季園林綠化與美化環(huán)境中具有重要的地位，每年的秋天，我國很多城市都會舉辦菊花展。但是大部分的菊花名品只會在深秋開花，無法滿足人類夏季和春節(jié)賞花的需求，為了改變這一現(xiàn)狀，中國菊花需要培育更多更新的品種，然而傳統(tǒng)的育種技術并不能改變這一現(xiàn)狀。轉基因技術是一種新興的育種手段，

2、它可以對菊花的花色、花型、花期、光敏感性和抗病蟲等方面進行改變，不僅拓寬了菊花育種的途徑而且加快菊花的育種進程，對改良和培育新的菊花品種具有重要意義。然而成功的基因轉化首先需要建立良好的菊花再生體系，要求一定的不定芽再生率和繁殖系數(shù)，且具穩(wěn)定性和重復性。本試驗主要圍繞菊花再生體系的建立進行了以下三方面研究:
　　1、菊花高效不定芽再生體系的建立
　　試驗最初選擇“晚熟紅”、“粉菊花”、“黃金球”三個菊花品種建立再生體系，結果

3、表明“粉菊花”和“黃金球”在不定芽再生篩選培養(yǎng)基上再生率低下，褐化嚴重，所以后期主要以“晚熟紅”不定芽再生體系的建立為主。在“晚熟紅”的再生體系建立中，利用無菌苗的葉片直接作組織培養(yǎng)的外植體，不僅降低了污染率，而且提高了再生率。在設定的30種不定芽直接誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L的不定芽誘導率最高，達到83.3％;而且在一定范圍內(nèi)，不定芽再生率隨NAA濃度的升高而升高，隨6-BA濃度的升高而

4、降低。在“晚熟紅”不定芽的擴繁過程中選擇用1/2 MS為基本培養(yǎng)基，腋芽產(chǎn)生植株的個數(shù)最多;生根培養(yǎng)基選擇用1/2 MS+NAA0.1 mg/L，產(chǎn)生的須根數(shù)量多且根比較粗壯。
　　2、菊花試管苗玻璃化現(xiàn)象的逆轉研究
　　玻璃化現(xiàn)象是試管苗培養(yǎng)過程中常見的一種現(xiàn)象，它嚴重影響試管苗的生長和生根培養(yǎng)，必須對其進行防治。玻璃化現(xiàn)象是一種綜合影響的結果，試驗中的任何一種因素不合適都可能造成玻璃苗的產(chǎn)生。本部分選取七個對玻璃苗產(chǎn)生影

5、響較大的因素，通過改變其含量和狀況觀察試管苗逆轉效果。試驗中除了改用暗培養(yǎng)會加重玻璃化現(xiàn)象以外，其他處理或多或少都會改善試管苗的玻璃化現(xiàn)象。其中改變培養(yǎng)基中蔗糖、瓊脂和激素等含量都能對玻璃苗產(chǎn)生明顯的逆轉效果。本試驗中增加蔗糖濃度到40 g/L、增加瓊脂含量為8.5 g/L以及降低激素含量為原培養(yǎng)基1/4三個處理的逆轉率分別為26.67％、30％、40％，都為同類處理中的最高值。由于產(chǎn)生玻璃化苗原因的復雜性，如能同時改善多種因素可能會達

6、到更好的逆轉效果，我們建議預防和逆轉應同時進行，以期達到完全消除玻璃化苗的效果。
　　3、菊花品種間的RAPD分析
　　利用RAPD技術對實驗室現(xiàn)有的10個菊花品種的遺傳多樣性和親緣關系進行分析，通過品種相似性和差異性比較找出10個品種之間的親緣關系遠近，并做出聚類分析。試驗結果中10個菊花品種有4個品種出現(xiàn)條帶，分別為“晚熟紅”、“粉菊花”、“黃鶴樓”和“小白菊”。數(shù)據(jù)分析采用NTSYS2.0軟件分析的方法，從分析結果可以