腎透明細胞癌發(fā)生和轉移相關的CD99選擇性剪接異構體的初步探討.pdf

1、目的:尋找人腎透明細胞癌(ccRCC)中發(fā)生和轉移相關CD99的選擇性剪接異構體，探討CD99選擇性剪接異構體表達與ccRCC轉移的關系，并探討其選擇性剪接異構體表達與ccRCC間的關系。 方法:前期采用cDNA基因表達譜芯片研究本實驗室建立的漢族人能夠無限傳代的2株在動物模型中證實具有轉移潛能的RCC細胞系(RCC05-TXJ、RCC05-ZYJ)基因表達譜，從中選取CD99為興趣基因。通過選擇性剪接數(shù)據(jù)庫(Alternati

2、ve Splicing Database，ASD)對基因CD99可能存在的選擇性剪接異構體進行預測。針對預測的結果，使用PrimerPremier5.0及Oligo6.0軟件設計6種預測異構體的RT-PCR引物，采用半定量RT-PCR檢測在轉移組織、發(fā)生及未發(fā)生轉移的原發(fā)癌組織、癌旁組織的各混合樣本中檢測預測異構體的表達情況。ccRCC轉移和原發(fā)腫瘤標本來源于2004年1月-2007年9月長海、長征醫(yī)院泌尿外科腎癌根治術的患者以及長征醫(yī)

3、院骨科轉移癌切除標本，其中包括9例已發(fā)生轉移的ccRCC原位組織和及其相應轉移組織，轉移包括骨轉移2例，淋巴結轉移2例及癌栓5例；21例未發(fā)生轉移的ccRCC原位組織和及其相應癌旁組織。男性18例，女性12例，平均年齡為52.04歲，最小年齡為40歲，最大為77歲，經(jīng)病理證實，均為腎透明細胞癌。將PCR產(chǎn)物凝膠回收，與pMD18-T載體連接，經(jīng)α篩選后轉染DH5α感受態(tài)細胞，菌液送測序，應用計算機軟件進行序列的比對分析。經(jīng)驗證從組織中擴

4、增的產(chǎn)物與生物信息學預測結果一致，確認為新的選擇性剪接異構體后，使用同樣的引物應用半定量RT-PCR在30例原發(fā)腫瘤(包括9例已發(fā)生轉移的原發(fā)癌組織及21例未發(fā)生轉移的癌組織)、21例癌旁組織及9例轉移組織樣本中檢測CD99Ⅰ、CD99Ⅱ和新型CD99選擇性剪接異構體(CD99Ⅲ)的表達水平。 結果:從6種預測異構體中篩選出一種新型異構體(CD99Ⅲ)。該異構體在轉移組織中表達(8/9)高于未發(fā)生轉移的原發(fā)癌組織(10/21)(