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文檔簡介
1、基因載體是基因治療的關鍵,病毒性基因載體在臨床應用上暴露出一系列安全問題,非病毒性載體的研究成為當務之急。殼聚糖是天然甲殼素的脫乙酰產(chǎn)物,具有優(yōu)良的生物相容性和生物可降解性,無免疫原性,能與DNA形成聚電解質(zhì)復合物,其復合保護DNA的能力強,成為當今最具潛力的非病毒性基因載體之一。 量子點(QDs)熒光明亮、穩(wěn)定,激發(fā)光譜寬,發(fā)射光譜窄,且發(fā)射波長可通過改變其粒徑大小和組成的材料來調(diào)控,QDs的研究已成為一門新興的交叉科學,尤其
2、是水溶性QDs作生物熒光標記物的研究是目前最有吸引力的研究領域之一。 本論文首先概述了殼聚糖及其改性衍生物作基因載體的最新研究進展,同時綜述了水溶性QDs的制備方法及應用研究進展,特別是它在生物、醫(yī)學中作熒光探針的最新研究。 葉酸(FA)是一種B族維生素,可特異性地與細胞表面的葉酸受體作用形成復合物,通過受體介導內(nèi)吞被細胞吸收且順利到達細胞核。葉酸受體可被許多腫瘤細胞超量表達,F(xiàn)A已被當作抗癌藥物的靶向分子而受到廣泛重視
3、。因此,將FA接枝到殼聚糖上,可使負載DNA后的殼聚糖具有良好的靶向性。 聚乙二醇(PEG)無毒,有良好的水溶性和生物相容性,已廣泛用于提高材料的生物相容性和半衰期。將PEG共價連接到殼聚糖上,可提高殼聚糖載體的水溶性及穩(wěn)定性,延長殼聚糖/DNA復合物在血漿中的循環(huán)時間,提高其基因轉(zhuǎn)染效率。 本研究將FA和PEG接枝到四種不同分子量的殼聚糖上,獲得了一系列改性的殼聚糖接枝共聚物。用FTIR、1HNMR、UV-Vis、DS
4、C和TEM對產(chǎn)物進行了表征,結果表明,F(xiàn)A和PEG被成功地接枝到殼聚糖上。 同時,以3-巰基丙酸為穩(wěn)定劑,制備了水溶性碲化鎘(CdTe)QDs,通過UV-Vis光譜和熒光光譜考察了制備條件對QDs熒光性能的影響,在最佳條件下制備了穩(wěn)定性好、熒光強度高的水溶性CdTeQDs。 以高熒光強度和高穩(wěn)定性的CdTeQDs標記殼聚糖及FA和PEG改性的殼聚糖,探討它們的相互作用機理發(fā)現(xiàn),殼聚糖及改性殼聚糖都能與QDs通過靜電作用自
5、組裝,形成穩(wěn)定的復合物,且復合物的熒光強度相對純QDs均明顯增強。測定二者最低相互作用濃度發(fā)現(xiàn),對于原始殼聚糖,當殼聚糖與QDs的體積比為0.003時,熒光強度達到最大值;而對于FA和PEG改性的殼聚糖,當殼聚糖與QDs的體積比為0.00375~0.004時,熒光強度達到最大值。殼聚糖及改性殼聚糖與QDs通過靜電作用形成核,PEG包裹在其外面,可看到明顯的核/殼結構。殼聚糖/QDs復合物大部分呈球形,有少量橢球形,大小為200-300n
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