絲素蛋白-雙相磷酸鈣-硫酸鈣復(fù)合骨水泥的生物安全性研究.pdf

1、目的：研究評(píng)價(jià)絲素蛋白/雙相磷酸鈣/硫酸鈣復(fù)合骨水泥的生物安全性，為后期材料的研制開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。
　　 方法：參照GB/T16886-2008/ISO10993：2003和GB/T16175-2008標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)體外試驗(yàn)（細(xì)胞毒性試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)）和體內(nèi)試驗(yàn)（急性全身毒性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、微核試驗(yàn)、皮內(nèi)刺激試驗(yàn)、致敏試驗(yàn)、肌肉植入試驗(yàn)），評(píng)價(jià)骨水泥的生物安全性。（1）在細(xì)胞毒性試驗(yàn)中，將L929細(xì)胞復(fù)蘇傳代后，制成單細(xì)胞

2、懸液，接種培養(yǎng)2d、4d、8d。采用MTT法，測(cè)定各組細(xì)胞增殖率。（2）在溶血試驗(yàn)中，將新鮮2％的人血紅細(xì)胞懸液加入實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，測(cè)各組吸光度值，計(jì)算溶血率。（3）在急性全身毒性試驗(yàn)中，經(jīng)小鼠尾靜脈將醋酸鉛溶液、生理鹽水、三種不同濃度的浸提液注入到相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。觀察24h、48h、72h時(shí)間段的小鼠一般情況，并記錄各個(gè)時(shí)間段的體重。（4）在熱原試驗(yàn)中，通過(guò)靜脈將三種不同濃度的浸提液和對(duì)照液注入到實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，觀察體溫變化情況。

3、（5）在微核試驗(yàn)中，將三種不同濃度的材料浸提液、生理鹽水、環(huán)磷酰胺分別經(jīng)尾靜脈注入各組小鼠體內(nèi)，采用四次染毒法后，處死取骨髓涂片，通過(guò)檢測(cè)骨髓微核率評(píng)估其遺傳毒性。（6）在皮內(nèi)刺激試驗(yàn)中，采用自身對(duì)照法，皮內(nèi)注射浸提液和對(duì)照液，觀察局部皮膚刺激情況，并分級(jí)。（7）在致敏試驗(yàn)中，采用最大劑量法，皮內(nèi)注射浸提液和對(duì)照液，通過(guò)誘導(dǎo)和激發(fā)階段后，觀察激發(fā)部位的皮膚情況。（8）在植入試驗(yàn)中，將消毒后的PMMA模型和自制的骨水泥模型，植入大白兔豎脊

4、肌內(nèi)，分別于術(shù)后1、4、8、12周各處死動(dòng)物2只，進(jìn)行病理切片，行組織學(xué)評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果：（1）細(xì)胞毒性試驗(yàn)中，顯微鏡下觀察可見(jiàn)陽(yáng)性對(duì)照組呈現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒性，實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)正常。實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞毒性分級(jí)最高為Ⅰ級(jí)，陰性對(duì)照組為0級(jí)，而陽(yáng)性對(duì)照組為V級(jí)。（2）溶血試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組可見(jiàn)溶血現(xiàn)象，而實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組均未見(jiàn)溶血現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)組溶血率最高為1.65％。（3）急性全身毒性試驗(yàn)，術(shù)后實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組各只小鼠一般情況良

5、好，無(wú)體重減輕，陽(yáng)性對(duì)照組體重明顯下降。（4）熱原試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組給藥后體溫最高升高為0.06℃，總和小于1.4℃。（5）微核試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組微核最高發(fā)生率為2.49‰，與陰性對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。（6）皮內(nèi)刺激試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組的皮內(nèi)刺激指數(shù)為0.0-0.2，是極輕微刺激，陽(yáng)性對(duì)照組為中、重度刺激。（7）致敏試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組均未見(jiàn)局部皮膚異常表現(xiàn)，陽(yáng)性對(duì)照組都出現(xiàn)了明顯的