血管內皮生長因子足細胞特異性下調與生理病理發(fā)育.pdf

1、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種有效的血管形成和血管通透性誘導因子,特異性地作用于血管內皮細胞,具有維持血管正常狀態(tài)和完整性、增加血管通透性、促進血管生成的作用。在正常成人和動物組織中表達水平較低,一些代謝旺盛、血供豐富的組織中VEGF表達水平略高,一些病理情況下可以過度表達。
　　 腎臟的主要功能是維持體液平衡,該過程中有兩百萬個腎小球參與血液濾過。在胚胎

2、和成年腎臟中VEGF主要表達于腎小球基質和球內細胞。在腎小管VEGF主要表達與遠端小管和集合管上皮。VEGF作為重要的血管生成調節(jié)因子在生理和病理條件下都發(fā)揮著重要作用。過高或過低的表達都會引起腎臟生理功能的障礙。VEGF在胚胎發(fā)育時期的功能和調節(jié)機制已被廣泛研究。VEGF單基因缺失就可以引起胚胎致死,因此對于VEGF在成年體內的研究很難進行。近年來通過基因打靶技術,成功實現了VEGF在成年體內的敲除,并由此引起了腎臟生理功能的紊亂,表

3、現為血栓性的微血管病。然而,對于VEGF在成年體內的研究依然非常有限。隨著抗VEGF治療在人體病理條件下的廣泛應用,這一療法顯示出了越來越多的并發(fā)癥。越來越多的人們開始意識到了VEGF在成年體內的重要性,關于更多的VEGF在成年體內的信息有待人們去研究。
　　 為了獲得更多的VEGF在成年體內的信息,也為了更好的模擬臨床的抗VEGF治療條件,理想的方法就是引入一種可調控可誘導的基因調節(jié)系統,利用該系統實現VEGF基因在特定時間特

4、定細胞的部分性下調。在本研究中我們引進了Tet-On基因調節(jié)系統,利用加減四環(huán)素(doxycycline,Dox)來實現對足細胞VEGF基因的表達調節(jié)。通過在VEGF基因啟動子區(qū)插入四環(huán)素操縱子序列(tet operator sequence,tetO),成功構建了可調控VEGF基因表達的轉基因鼠模型(VEGFtetO)。同時,我們建立了在足細胞特異性啟動子引導下表達四環(huán)素阻遏蛋白(tetR-Krab)的轉基因鼠模型Nephrin-te

5、tR-Krab(tg／+)。利用加減四環(huán)素可以實現四環(huán)素阻遏蛋白與四環(huán)素操縱子的可逆結合。通過將上述兩種轉基因鼠雜交,在得到的雙轉基因鼠VEGF(tetO／tetO)／Nephrin-tetR-Krab(tg／+)中成功實現了對足細胞VEGF的表達下調,且該下調導致了很多腎臟方面的并發(fā)癥。該研究通過不完全抑制或部分性降低VEGF表達,很好的模擬了臨床的抗VEGF治療條件,將為臨床診斷和治療提供可靠的依據。
　　 本研究的目的是探