二甲雙胍對Ⅱ型膠原誘導類風濕關節(jié)炎大鼠模型的抗炎及關節(jié)保護作用的研究.pdf

1、背景和目的:
　　類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid rthritis,RA)是一種以累及周圍關節(jié)為主的,系統(tǒng)性、炎癥性、自身免疫性疾病。致殘率高,是造成我國人群喪失勞動力和致殘的主要疾病之一。其病理特點為累及周身關節(jié)的增生性和侵蝕性滑膜炎,呈進行性病變,終生反復,最終導致關節(jié)侵蝕畸形、功能喪失。盡管RA的病因及發(fā)病機制尚未完全明確,但研究證實:RA滑膜組織中浸潤的單核-巨噬細胞、淋巴細胞等能夠產(chǎn)生大量的細胞因子,這些細胞因子通過

2、作用于多種細胞并相互調節(jié),形成一個復雜的網(wǎng)絡,最終導致了類風濕關節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展。實驗證實,TNF-α是在類風濕關節(jié)炎的發(fā)病機制中居于中心地位的炎癥因子,它不僅能夠通過NF-κB、JAK/STAT等通路介導RA的炎癥及關節(jié)破壞反應,還可促使滑膜細胞、纖維母細胞、巨噬細胞等以自分泌或旁分泌的形式產(chǎn)生多種炎癥因子,例如IL-1β、IL-6等,共同作用于類風濕關節(jié)炎的炎癥及關節(jié)破壞反應。所以以TNF-α為靶點的TNF-α拮抗劑-依那西普(et

3、anercept)、阿達木單抗(adalilmumab)等為代表的生物制劑的出現(xiàn),被認為是RA治療的革命性變化。但是生物制劑昂貴且生物安全性尚有待實驗繼續(xù)證實,所以未被廣泛應用。而且目前標準 RA用藥包括非甾體類抗炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAID)、激素、改善 RA病情藥物(disease-modifying antirheumatic drugs,DMARDs)并不能夠改善患

4、者遠期癥狀并且有較強的毒副作用。所以,尋找新的改善RA病情藥物仍然是臨床面臨的挑戰(zhàn)性問題。近年來研究表明,二甲雙胍不僅可以發(fā)揮全身性的抗炎作用,降低炎癥因子水平,升高抗炎因子水平;還能夠減弱炎癥因子介導的軟骨分解作用,維持體內軟骨穩(wěn)態(tài),保護軟骨;還可以調節(jié)成骨細胞的細胞因子的產(chǎn)生來抑制破骨細胞的生成,減少破骨細胞的分化,保護骨質;最終起到關節(jié)保護的作用。本研究擬在Ⅱ型膠原誘導類風濕關節(jié)炎大鼠模型上證實二甲雙胍對類風濕關節(jié)炎大鼠模型具有抗

5、炎和關節(jié)保護的作用。
　　目的:
　　1.研究二甲雙胍對Ⅱ型膠原誘導類風濕性關節(jié)炎大鼠模型的抗炎作用;
　　2.研究二甲雙胍對Ⅱ型膠原誘導類風濕性關節(jié)炎大鼠模型的關節(jié)保護作用。
　　方法:
　　1.于4℃下,將Ⅱ型膠原溶于0.01 mol/L醋酸中,制成最終濃度為2mg/ml的混合液,靜置過夜,待其完全溶解;
　　2.冰浴下,用高速勻漿機將混合液與完全弗氏佐劑以1:1相配比制成乳劑;
　　3.在

6、大鼠尾部、肛周處皮膚多點皮內注射0.3ml乳劑,實驗第7日重復操作,加強誘導一次;
　　4.造模成功后,于實驗第7日隨機分組,給予各用藥組高劑量二甲雙胍(100mg/kg/d),低劑量二甲雙胍(50mg/kg/d),甲氨蝶呤(2.7mg/kg/w)灌胃干預治療;
　　5.每隔2日對各組大鼠進行關節(jié)炎評分及距骨寬度測量,于第28日處死取材,再進行大鼠踝關節(jié)X片,MICRO-CT三維數(shù)據(jù)重建,HE染色,大鼠血清中炎癥因子水平及抗

7、炎因子水平等檢測。
　　結果:
　　1.連續(xù)觀察大鼠后足關節(jié)炎評分及距骨寬度測量示:高劑量二甲雙胍組關節(jié)炎評分及距骨寬度較誘導組顯著降低(P<0.05),其余兩用藥組較誘導組也有一定降低關節(jié)炎評分及距骨寬度的作用(P<0.05);
　　2.Elisa結果示:誘導組大鼠血清中炎癥因子TNF-α,IL-1β,IL-6水平顯著升高,抗炎因子IL-10水平顯著降低;高劑量二甲雙胍治療組可顯著降低大鼠血清中炎癥因子TNF-α,I

8、L-1β,IL-6水平(P<0.05),升高抗炎因子IL-10水平(P<0.05);低劑量組及甲氨蝶呤治療組大鼠血清中炎癥因子TNF-α,IL-1β,IL-6水平較誘導組有所降低(P<0.05),抗炎因子IL-10水平也有升高(P<0.05)。
　　3.X片示:誘導組出現(xiàn)嚴重的軟組織腫脹和骨質吸收,關節(jié)結構破壞,嚴重損毀;高劑量二甲雙胍組可顯著保留關節(jié)結構并使其免受侵蝕,而低二甲雙胍劑量組和甲氨蝶呤治療組效果比高劑量二甲雙胍組弱;

9、
　　4.MICRO-CT結果示:誘導組出現(xiàn)嚴重的骨質吸收、溶解現(xiàn)象,骨質表面十分毛糙,并出現(xiàn)空洞,關節(jié)完全損毀;高劑量二甲雙胍治療組:未出現(xiàn)嚴重的骨質吸收、溶解現(xiàn)象,骨質表面有些毛糙、未出現(xiàn)空洞,關節(jié)結構保存完整;甲氨蝶呤治療組及低劑量二甲雙胍治療組:同樣出現(xiàn)出現(xiàn)嚴重的骨質吸收、溶解現(xiàn)象,骨質表面十分毛糙,同時大量出現(xiàn)骨質空洞,關節(jié)完全損毀,程度均較B組結果有所降低。
　　5.HE染色結果示:誘導組HE染色結果示:出現(xiàn)云片

10、狀炎癥細胞,深染藍色,炎癥細胞嚴重侵蝕骨質,關節(jié)間隙消失,完全被炎癥細胞填充;甲氨蝶呤治療組及低劑量二甲雙胍治療組兩組HE結果:出現(xiàn)大量炎癥細胞,分布于關節(jié)間隙和軟骨及骨質中,關節(jié)間隙分辨不清,炎癥細胞同樣嚴重侵蝕骨質,關節(jié)間隙幾乎消失,被大量炎癥細胞充斥;高劑量二甲雙胍治療組HE結果出現(xiàn)少量炎癥細胞,,呈零星分布于關節(jié)間隙,關節(jié)間隙正常、清晰,炎癥細胞未嚴重侵蝕骨質,粉紅色軟骨、深紅色骨質均清晰可見,很少破壞。
　　結論: