17-DMAG對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的凋亡影響及其蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景:
　　結(jié)腸癌是結(jié)腸粘膜上皮在環(huán)境、遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡性病變。近年來，我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢(shì)。結(jié)腸癌通常起病隱匿，早期往往無明顯的臨床表現(xiàn)，病情發(fā)展緩慢，當(dāng)出現(xiàn)明顯的癥狀時(shí)大多已到了中晚期。深入研究癌癥發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，進(jìn)而開發(fā)癌癥的新型治療藥物，是現(xiàn)今基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的重要前沿。17-DMAG為HSP90抑制劑，有望成為進(jìn)展期結(jié)腸癌的新型治療藥物。
　　研究目的:
　　研究HSP

2、90抑制劑17-DMAG（17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格爾德霉素）對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的凋亡的影響，進(jìn)一步使用蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究其調(diào)控的蛋白質(zhì)的變化。
　　研究方法:
　　一、AnnexinV——FITC/PI雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)17-DMAG作用后HT-29細(xì)胞的凋亡率的變化。
　　二、免疫印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Na+-K-ATPase和Prohibitin在17-DMAG作用HT-29細(xì)胞24小時(shí)后質(zhì)膜蛋白質(zhì)純度

3、變化。
　　三、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小時(shí)組與對(duì)照組的質(zhì)膜蛋白質(zhì)，運(yùn)用雙向凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)，快速銀染法染色膠、掃描，進(jìn)一步用ImageMaster2DPlatinum6.0圖像分析軟件分析每組中的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　四、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小時(shí)組與對(duì)照組的分泌蛋白質(zhì)，運(yùn)用雙向凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)，快速銀染法染色膠、掃描，進(jìn)一步用ImageMaster2DPlatinum6.0圖像

4、分析軟件分析每組中的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　研究結(jié)果:
　　1.AnnexinV-FITC雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組HT-29細(xì)胞24小時(shí)自然早期凋亡率為（0.87±0.02）％，0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小時(shí)后細(xì)胞早期凋亡率分別為（2.32±1.78）％、(4.93±0.46)％、（6.86±1.36）％與(7.59±1.28)％;正常對(duì)

5、照組HT-29細(xì)胞24小時(shí)的總自然凋亡率（早期+晚期）為（6.3±0.75）％，0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小時(shí)后細(xì)胞總凋亡率分別為(8.51±1.91)％、(20.88±13.97)％、（25.11±1）％和(32.11±3.13)％，17-DMAG作用HT-29細(xì)胞24h的凋亡率與對(duì)照組細(xì)胞凋亡率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P=0.000)，此外，0.5μmol/

6、L17-DMAG作用HT-29細(xì)胞12h、24h和36h的早期凋亡率和總凋亡率與相應(yīng)的對(duì)照組比較均有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.0.5μmol/L17-DMAG藥物作用HT-29細(xì)胞24h后，Na+-K+-ATPase純度增加而Prohibitin純度下降。0.5μM17-DMAG藥物作用HT-29細(xì)胞24小時(shí)組與對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn)29個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)。
　　3.0.5μM17-DMAG藥物作用HT-29細(xì)胞