健脾清熱活血方藥介導Wnt-β-catenin-TCF通路干預潰瘍性結腸炎相關癌變的研究.pdf

1、目的:觀察潰瘍性結腸炎相關癌變(ulcerativecolitisassociatedcarcinogenesis，UCAC或簡稱潰結相關癌變)小鼠組織形態(tài)、超微結構以及結腸黏膜β連環(huán)蛋白(β-catenin)、T細胞因子4(Tcellfactor4，Tcf-4)、C-myc、細胞周期素1(CyclinD1)表達變化，探討健脾清熱活血方藥防治潰結相關癌變的可能機制。
　　 方法:120只清潔級Balb/c小鼠隨機分6組，每組20

2、只，分設正常組、模型組、對照組(0.4g/kg)、治療組(4.29g/kg，8.58g/kg，17.16g/kg);除外正常組，其余各組采用DMH/DSS復合法制備潰結相關癌變模型，模型制備結束后，對照組給予美沙拉嗪配制液，治療組分別給予不同劑量健脾清熱活血方藥水提液，模型組和正常組予等劑量生理鹽水灌胃處理，連續(xù)干預16周。應用光鏡、透射電鏡觀察潰結相關癌變小鼠結腸組織形態(tài)學及超微結構變化，應用免疫組化(Immunohistochemi

3、stry)、Western-blot技術、實時熒光定量(Real-time)PCR技術檢測β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1等在潰結相關癌變中的表達以及不同劑量健脾清熱活血方藥干預上述指標的變化。
　　 結果:(1)正常組小鼠結腸肉眼未見明顯異常，光鏡下可見部分結腸黏膜有少許炎性細胞浸潤，電鏡下上皮細胞大小一致、排列整齊、結構完整，細胞器均未見明顯異常;模型組結腸肉眼可見漿膜層散在、多處息肉狀隆起變化，

4、光鏡下可見黏膜上皮脫落，腺體萎縮、高級別上皮內瘤變，部分癌變，電鏡下可見大量大小不等、排列紊亂的上皮細胞，胞核不規(guī)則、核仁增大并上移，線粒體大量增生、形態(tài)欠規(guī)則，局灶可見明顯擴張、腫脹;對照組和各治療組小鼠近盲腸處結腸黏膜肉眼可見充血、水腫，均較模型組有不同程度的減輕，漿膜層偶可見息肉狀隆起樣改變，光鏡下各組結腸黏膜均可見到充血腫脹，個別輕度不典型增生和大量淋巴濾泡出現(xiàn)、未見潰瘍及癌變，電鏡下各組亦均可見上皮細胞體積明顯變小，核染色質邊

5、集、核固縮或碎裂，核膜斷裂，明顯調亡小體形成。(2)正常組β-catenin胞膜陽性表達，Tcf-4、C-myc、CyclinD1為陰性;模型組β-catenin、Tcf-4呈胞質和/或胞核異位表達，C-myc、CyclinD1呈胞漿異位表達，與正常組有明顯差異(P＜0.05）;對照組和治療組β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1陽性表達減少，多以胞膜為主，均與模型組有明顯差異(P＜0.05)，對照組與各治療組之間

6、均有明顯差異(P＜0.05)，其中各治療組之間無明顯差異(P＞0.05)。(3)與正常組比較，模型組結腸β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA呈高表達特點(P＜0.05）;對照組和治療組可明顯下調β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA，與模型組比較，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，對照組與各治療組之間均有明顯差異（P＜0.05），其中各治療組之間無明顯差異(P＞0