樁蛋白（Paxillin）和CD44v6的表達與食管癌生物學行為相關性的研究.pdf

1、目的：食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，該腫瘤轉(zhuǎn)移快，五年生存率低，嚴重危害著我國人民的身體健康。近年來，雖然手術(shù)技術(shù)、化學療法和放射療法的水平有明顯提高，但食管癌的五年生存率卻沒有明顯的提高，這主要是因為許多腫瘤細胞在術(shù)前已通過淋巴管和血管發(fā)生了微小轉(zhuǎn)移。 Paxillin是近年發(fā)現(xiàn)的一種重要的細胞黏附因子，人類Paxillin基因定位于染色體12q24。Paxillin可與v-Src、v-Crk、BCR-AB2等多種致瘤性蛋

2、白結(jié)合，擾亂甚至誤導正常黏附和控制細胞增殖所需的生長因子信號級聯(lián)，并涉及到組織中細胞骨架效應的改變，這種骨架的改變是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要分子機制之一。目前，國內(nèi)外已對肺癌、肝癌、胃癌等腫瘤的Paxillin表達進行了報道，提示Paxillin的表達使腫瘤細胞與周圍非腫瘤細胞之間的局部黏附作用加強，腫瘤細胞更容易發(fā)生遷移進而形成轉(zhuǎn)移，并證實了Paxillin的高表達與腫瘤轉(zhuǎn)移相關。 CD44跨膜糖蛋白是一種細胞黏附分子，它能介導細胞與細

3、胞或細胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合的過程。Günthert等首先報道僅在大鼠自發(fā)性胰腺癌高轉(zhuǎn)移細胞株表達的CD44亞型，把這種亞型轉(zhuǎn)染到無明顯轉(zhuǎn)移能力的細胞株，結(jié)果這種細胞株發(fā)生了淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移。而且，針對這個變構(gòu)體的單克隆抗體有抑制轉(zhuǎn)移的效果，這個片斷被命名為CD44v6，隨后大量研究表明在結(jié)腸癌、乳癌和胃癌中，CD44v6的表達與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后有密切關系。 迄今為止，人們對食管癌Paxillin表達的研究未見報道，對于C

4、D44v6在食管癌癌旁及淋巴結(jié)中的表達研究較少。本研究采用免疫組化SP法、激光掃描共聚焦等技術(shù)對食管癌癌組織、癌旁組織及淋巴結(jié)組織中Paxillin、CD44v6的表達進行檢測，評估兩者的表達與食管癌的發(fā)生、發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移的關系，通過這些研究，闡明Paxillin和CD44v6表達與人食管癌生物學行為的相關性，評價其對食管癌的診斷和治療價值。 方法：1取材：采集食管癌癌組織111例，其中鱗癌94例，腺癌8例，小細胞癌9例；鱗癌中

5、，按臨床分期，分為0期、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期；按腫瘤浸潤深度分Tis、T1、，T2、T3、T4；根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組癌和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組癌；按食管癌鱗癌分化程度：分低、中、高分化鱗癌；取鱗癌癌旁組織105例，其中癌旁1cm組織、3cm組織、5cm組織各35例；取食管癌周圍淋巴結(jié)83例，其中轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)40例，無轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)43例；正常食管黏膜24例作為正常對照組。 2光鏡技術(shù)：應用HE染色進行病理學診斷、應用免疫組

6、化染色SP法，結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測Paxillin、CD44v6的陽性表達情況。 3激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)：取食管鱗癌組織，采用Paxillin標記紅光，CD44v6標記綠色熒光進行熒光雙重標記，進行Paxillin、CD44v6定位的研究。 3電鏡技術(shù)：取正常食管黏膜與食管癌組織，透射電鏡下觀察正常食管上皮細胞與食管癌癌細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：1HE染色結(jié)果正常食管黏膜上皮為未角化的復層扁平上皮。上皮的基底層為

7、1-2層矮柱狀嗜堿性較強的細胞，向游離面移行，中層細胞形狀漸變?yōu)椴灰?guī)則形、三角形，也稱為棘層，近游離面的表層細胞為數(shù)層扁平細胞；食管癌癌組織上皮的正常結(jié)構(gòu)層次被打亂，癌組織呈片狀，被結(jié)締組織所分隔，癌細胞異型性明顯，胞核體積增大，核漿比例失常，核深染，鱗癌細胞核的直徑大于細胞直徑的二分之一。 2免疫組化結(jié)果Paxillin免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒。多分布于細胞膜和(或)細胞漿內(nèi)。正常食管黏膜表達量少，集中表達在基底層，呈弱陽性。

8、鱗癌癌組織的表達部位多集中在癌細胞的胞漿里，靠近癌巢周邊的癌細胞呈強陽性表達，癌巢中央陽性表達較弱。腺癌、小細胞癌多集中在癌細胞胞膜上，在癌旁組織及淋巴結(jié)中的陽性表達也集中在胞膜上。 CD44v6免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒。多分布于細胞膜和(或)細胞漿內(nèi)。正常食管黏膜有少量表達，集中表達在基底層，不超過基部三分之一。鱗癌、腺癌、小細胞癌均表達在癌細胞的細胞膜上，癌旁組織及淋巴結(jié)中的表達部位也主要集中在胞膜上。 2.1Pax

9、illin和CD44v6在正常食管黏膜及食管癌中的表達2.1.1鱗癌組與腺癌組的Paxillin和CD44v6表達率均顯著高于正常黏膜；小細胞癌的Paxillin和CD44v6表達率與在正常黏膜表達率差異性不顯著。 鱗癌組與腺癌組Paxillin、CD44v6的陽性表達率均顯著高于其在小細胞癌組中的表達；而鱗癌與腺癌組中的Paxillin和CD44v6表達率無顯著性差異。 2.1.2Paxillin和CD44v6表達在臨

10、床各期組間均有顯著性差異 2.1.3Paxillin和CD44v6的表達在浸潤深度組間均有顯著性差異 2.1.4有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的鱗癌組織中的Paxillin和CD44v6表達顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中表達 2.1.5Paxillin和CD44v6表達與患者年齡、性別、組織分化程度無關 2.2Paxillin和CD44v6在食管鱗癌原發(fā)癌組織中的表達率與癌旁1cm組織中的表達率無顯著性差異，癌旁1cm組織中P

11、axillin和CD44v6的陽性表達率均顯著高于癌旁3cm，而癌旁3cm組織與癌旁5cm組織兩者的表達均有顯著性差異，癌旁5cm組織中Paxillin和CD44v6表達與正常食管黏膜中的陽性表達均無顯著性差異 2.3Paxillin和CD44v6在淋巴結(jié)組織中的表達：Paxillin和CD44v6在食管原發(fā)癌組織與轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)組織中均呈陽性，兩者間無顯著性差異；在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(陽性淋巴結(jié))中表達均顯著高于在非轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(陰性淋巴

12、結(jié))中的表達。 3激光掃描共聚焦結(jié)果在激光激發(fā)下，在食管鱗癌癌細胞胞漿和胞膜Paxillin表達區(qū)呈紅色團片狀免疫熒光標記，CD44v6呈綠色，當兩者同時被觀察時，可見其重疊的部位呈黃色。 4電鏡結(jié)果透射電鏡下見癌細胞為幼稚型，核大，核漿比例在2：1至3：1，核內(nèi)異染色質(zhì)增多，核染色質(zhì)成粗顆粒狀積聚成團，電子密度增高，在核內(nèi)大小不一、分布不均，核分裂像多見。結(jié)論： 1Paxillin和CD44v6表達部位均位于胞

13、漿和/或胞膜，Paxillin以胞漿為主，CD44v6以胞膜為主； 2Paxillin和CD44v6在鱗癌和腺癌的陽性表達顯著高于正常食管黏膜； 3Paxillin和CD44v6在小細胞癌的表達與正常食管黏膜無顯著性差異； 4從癌旁3cm處始，隨著離原發(fā)癌病灶的距離增遠，Paxillin和CD44v6的表達漸低； 5Paxillin和CD44v6在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達均顯著高于在無轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達