西洋參活性成分及其指紋圖譜研究.pdf

1、本文對西洋參多糖的提取和測定進行了較深入的研究，為西洋參多糖作為功能食品基料和新藥開發(fā)的研究奠定了應用基礎；建立了西洋參皂苷類的HPLC同步測定方法，對其提取方法也進行了初步探討；首次將現(xiàn)代分析技術ICP-MS及HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術應用于西洋參無機元素及元素形態(tài)分析領域；結合化學計量學方法較系統(tǒng)地研究了西洋參指紋圖譜及西洋參樣品的分類。主要研究內(nèi)容與所得結果如下： 1.將多種植物活性成分提取新技術應用于西洋參多糖的提取研

2、究。通過對回流、微波、超聲、微波-回流、超聲-回流、酶解-回流、酶解-微波和酶解-超聲8種提取方法進行對比，得出西洋參多糖提取的最佳方法為酶解-回流法，在此基礎上對酶用量、固液比、酶解時間與提取溫度等進行單因素試驗，初步確定各因素的最佳范圍；進一步通過正交試驗，得出西洋參多糖酶解-回流法提取的最佳工藝條件為：以水為溶劑，固液比1：12，20μL.g-1(相對西洋參干重)植物復合水解酶，50℃酶解1.5h，100℃提取2次。 2.

3、將蒽酮-硫酸法用于測定西洋參多糖的含量，并對不同產(chǎn)地西洋參中的多糖含量進行測定和比較。西洋參用水提取，經(jīng)多級處理除去脂類、單糖、雙糖、低聚糖、氨基酸、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)制得西洋參精制多糖，精制多糖溶解后與蒽酮-硫酸試劑顯色，通過掃描確定最大吸收波長；然后用精制多糖測得西洋參多糖對葡萄糖的換算因子。結果表明，該測定方法簡便可行，供試液在4h內(nèi)顯色穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好，平均回收率為96.9％(RSD=1.33％，n=4)。來源于不同產(chǎn)地的西洋參多糖含

4、量存在一定差異，其含量范圍為6.32％～10.8％。 3.建立西洋參中人參皂苷Rb1含量測定的現(xiàn)代分析方法，并對12種西洋參中的總皂苷及人參皂苷Rb1進行測定，以觀察不同產(chǎn)地對其含量變化的影響。人參總皂苷含量測定采用比色法；人參皂苷Rb1含量測定采用高效液相色譜法，人參皂苷Rb1含量在62～1230μg.mL-1之間呈良好線性，平均回收率為99.2％(RSD=1.69％，n=6)；12種西洋參中，有10種西洋參所含人參總皂苷均大

5、于4％，人參皂苷Rb1含量大于1％。本法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好、結果準確可靠，可作為一種西洋參質(zhì)量的控制方法。 4.建立西洋參中7種人參皂苷含量同步測定的HPLC現(xiàn)代分析方法，并對12種西洋參中的7種人參皂苷進行測定，在此基礎上建立西洋參皂苷的色譜指紋圖譜。試驗確定的HPLC條件為：采用梯度洗脫，使用AlltimaC18色譜柱，乙腈-0.05％磷酸水溶液為流動相，流速為1.2mL.min-1，柱溫為35℃，紫外檢測器，在203

6、nm處測定12種西洋參樣品。在選定的色譜條件下每種成分在各自的濃度范圍內(nèi)均具有較好的線性相關性，7種人參皂苷的加標回收率為94.1～97.9％。對色譜指紋圖譜進行相似度和聚類分析計算，得到了令人滿意的結果，該法為西洋參樣品的鑒定提供了較全面的信息，并為HPLC在復雜組分的樣品分析和鑒別方面開拓了新的應用領域。 5.首次以西洋參7種人參皂苷的提取率為指標，分別選用不同溶劑和輔助方法，對多種西洋參皂苷的提取方法進行比較。結果表明，采

7、用不同提取溶劑和不同提取方法，上述7種人參皂苷的提取率有一定差異。該結果可為西洋參皂苷的提取工藝優(yōu)化提供可靠的理論與試驗依據(jù)，從而為西洋參皂苷單體的分離純化奠定提取工藝基礎。 6.首次將ICP-MS方法以及HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術用于西洋參無機元素測定及西洋參提取物的元素形態(tài)分析。對西洋參中的多種無機元素用不同極性的溶劑比如水、乙醇、氯仿等進行提取，考察這些元素在不同溶劑中的溶出特性，采用ICP-MS法對其進行定量測定；并

8、將高效液相色譜(HPLC)和電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)聯(lián)用，對西洋參水提液中的多種無機元素形態(tài)進行初步研究。結果表明，元素提取率隨著提取溶劑極性的增加(從弱極性到強極性的水)而增大，與溶劑極性強弱基本上呈正比例關系，特別表現(xiàn)在Mg、Ca、P、Mn、Sr、Mo、Pb等元素上；采用HPLC(C-18柱)與ICP/MS聯(lián)用技術，在以0.1mol.L-1的稀硝酸為流動相，0.4mL.min-1的流速，進樣量為20μL的條件下，各元素的

9、無機態(tài)和有機態(tài)得到較好分離。試驗還發(fā)現(xiàn)，西洋參多糖中各種元素的含量均明顯高于西洋參樣品，而不同方法提取的多糖中元素含量有一定差異；西洋參總皂苷中Cr，Ni，Cu，Zn，Pb元素的含量明顯高于西洋參樣品，而其它元素含量較低；這些結果可為西洋參多糖、西洋參皂苷的綜合開發(fā)利用及其藥效學研究提供理論依據(jù)。 7.首次進行西洋參樣品無機元素指紋圖譜的研究。采用ICP-MS方法測定了12個西洋參樣品中Mg，Al，P，Ca，V，Cr，Mn，F(xiàn)e

10、，Co，Ni，Cu，Zn，As，Se，Sr，Mo，Cd，Pb等元素的含量，在此基礎上建立西洋參樣品的無機元素指紋圖譜。根據(jù)元素含量測定結果，采用SPSS主成分分析法對西洋參中的特征元素進行分析，主成分分析選出了5個主因子，得出西洋參的特征元素為Fe，Al，V，Mn，Mg，Sr，Mo，Ca，Cu；用SPSS聚類分析法進行聚類分析，Q型聚類將12個西洋參樣品聚成5大類，表明元素的分布特征與西洋參品種關系顯著；主成分分析、聚類分析等多元統(tǒng)計方

11、法是西洋參無機元素分析的有效方法，對西洋參品種與質(zhì)量的鑒定有一定的理論意義和實用價值。 8.首次采用化學計量學方法建立西洋參藥材分類方法。采用主成分分析法、聚類分析法對所測得的西洋參樣品的23個變量進行分類研究，結果表明：采用主成分分析法，12個西洋參樣品能得到合理分類，而各人參皂苷的含量是決定西洋參樣品分類的第一關鍵因素，元素Mn，Cu，As，Ni，Mo以及西洋參多糖含量是第二關鍵因素；以4種不同的聚類變量進行聚類分析，其聚類