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文檔簡介
1、背景
IgA腎病是全世界最常見的原發(fā)性腎小球疾病,容易進展至終末期腎臟病(endstagerenaldisease,ESRD)。但是,IgA腎病的診斷和動態(tài)檢測依賴腎組織活檢,而腎活檢為有創(chuàng)性的檢查,且重復腎活檢患者多難以接受。因而,探索IgA腎病非侵入性的診斷方法任重道遠。miRNAs是一種參與轉錄后水平調控的非編碼RNA,其表達異??赡軐е氯祟惗喾N疾病,包括IgA腎病,異常表達的miRNAs可以導致IgA腎病患者腎組織細胞
2、結構的改變及類型的轉化、免疫分子結構的改變、細胞信號傳導的異常等,從而引起腎組織損傷。目前,眾多的研究發(fā)現血漿及尿液中存在穩(wěn)定表達的miRNAs,可抵制RNase的降解。因此,血漿或尿液中與IgA腎病病理形態(tài)學改變相關的miRNAs或許可以成為其新的診斷標志物。然而,miRNAs的表達水平與IgA腎病病情的關系尚無確切結論,血漿或尿液中miRNAs的表達水平是否能夠真正取代腎活檢仍值得探討。本研究選取與IgA腎病發(fā)病和腎臟纖維化相關的幾
3、種miRNAs,通過對IgA腎病患者的腎組織、血漿及尿液miRNAs同時進行檢測,初步研究腎組織、血漿及尿液miRNAs的表達與IgA腎病病情的相關性。
目的
通過檢測miR-148b、miR-194、miR-200a及miR-382在原發(fā)性IgA腎病腎組織、血漿及尿液中的表達水平,初步探討miRNAs的表達與該疾病病情的相關性,為血漿及尿液中的miRNAs在IgA腎病診斷中的應用提供參考,也為尋找IgA腎病非侵入性
4、診斷標志物提供新思路。
方法
1.選取鄭州大學第一附屬醫(yī)院腎臟內科2012年12月至2013年6月首次經腎組織活檢及臨床、實驗室檢查綜合確診為原發(fā)性IgA腎病患者34例,平均年齡(32.74±10.57)歲,男女比例1∶1.1。該34例入組患者在腎活檢當日清晨同時留取晨尿及空腹靜脈血標本,其中7例患者留取腎穿刺組織標本。收集所有入組患者的臨床及病理資料,并對其病理結果進行Hass分級,其中符合Hass分級Ⅰ-Ⅱ級患者
5、10例,Ⅲ級17例,Ⅳ-Ⅴ級7例。對照組選自我院同期門診年齡及性別匹配的健康體檢者13例,每個入組對象同時留取晨尿及空腹靜脈血標本,對照組腎組織標本選自同期在我院行腎腫瘤切除術的患者7例,取遠離腫瘤的正常腎組織。
2.采用TRIzolLSReagent(Invitrogenlifetechnologies)抽提腎組織、血漿及尿液中的RNA,使用NanoDrop(@)ND-1000(Nanodrop,Wilmington,Del
6、aware,USA)測定RNA的濃度和純度,應用實時熒光定量PCR(real-timePCR)技術定量檢測腎組織、血漿及尿液中miR-148b、miR-194、miR-200a及miR-382的表達水平。選擇RNU6B作為內參,數據采用2-ΔΔCt法進行分析。
3.比較(1)IgA腎病組和對照組間腎組織、血漿及尿液4種miRNAs的表達水平是否有差異;(2)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達水平與Hass分級的關系
7、;(3)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達水平與臨床指標的關系;(4)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達水平與牛津病理分型的關系。正態(tài)分布數據兩組間比較采用t檢驗,多組間比較采用One-wayANOVA,多個變量間的兩兩比較采用Bonferroni檢驗,將檢驗水準校正為0.017(0.05/3)。相關性檢驗應用Pearson相關(服從正態(tài)分布的資料)或Spearman秩相關(不服從正態(tài)分布的資料)。以P<0.05
8、表示差異有統(tǒng)計學意義。
結果
納入IgA腎病組血漿及尿液標本各34例,腎穿刺組織標本7例;對照組血漿及尿液標本各13例,正常腎組織標本7例。
(1)IgA腎病組和對照組間腎組織、血漿及尿液miRNAs表達水平的比較:腎組織miR-148b、miR-194、miR-200a的表達水平下調(P<0.05),miR-382的表達水平上調(P<0.05);血漿miR-148b、miR-194、miR-382的表達水
9、平下調(P<0.05),miR-200a的表達水平上調(P<0.05);尿液miR-148b、miR-382的表達水平上調(P<0.05),miR-194、miR-200a的表達水平下調(P<0.05)。
(2)不同Hass分級IgA腎病患者血漿miRNAs表達水平分析:miR-148b和miR-194的表達水平隨IgA腎病Hass分級的升高而下降(P<0.017)。Hass分級Ⅲ級和Ⅳ-Ⅴ級患者miR-382的表達水平低于Ⅰ
10、-Ⅱ級(P<0.017)。Hass分級Ⅰ-Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ-Ⅴ級患者miR-200a的表達水平無顯著性差異(P>0.05)。
(3)不同Hass分級IgA腎病患者尿液miRNAs表達水平的分析:IgA腎病Hass分級Ⅳ-Ⅴ級患者miR-148b的表達水平高于Ⅲ級(P<0.017)。Hass分級Ⅰ-Ⅱ級和Ⅲ級患者miR-194的表達水平高于Ⅳ-Ⅴ級(P<0.017)。Hass分級Ⅰ-Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ-Ⅴ級患者miR-200a、miR
11、-382的表達水平無顯著性差異(P>0.05)。
(4)IgA腎病患者血漿及尿液miRNAs的表達水平與臨床指標的相關性分析:IgA腎病患者尿液miR-148b的表達水平與血清尿酸、血清補體C4呈負相關性(P<0.05),尿液miR-382的表達水平與尿紅細胞計數呈正相關性(P<0.05)。尿液miR-194、miR-200a及血漿4種miRNAs與血清肌酐、腎小球濾過率、血尿素氮、血尿酸、血胱抑素、血總蛋白、血白蛋白、血球蛋
12、白、血清總膽固醇、血清三酰甘油、血清高密度脂蛋白、血清低密度脂蛋白、血紅蛋白、24小時尿蛋白定量、尿紅細胞計數,血清補體C3、血清補體C4、血壓均無顯著相關性(P>0.05)。
(5)不同牛津病理分型IgA腎病患者血漿及尿液miRNAs表達水平的比較:牛津病理分型T0型IgA腎病患者尿液miR-200a的表達水平高于T1-2型(P<0.05),尿液miR-148b、miR-194、miR-382及血漿4種miRNAs的表達水平
13、在E、S、T分型間無顯著性差異(P>0.05)。
結論
IgA腎病組腎組織、血漿及尿液miR-148b、miR-194、miR-200a、miR-382的表達水平與對照組相比均存在顯著性差異,且尿液miRNAs的表達水平與腎組織一致性較好。血漿miR-148b、miR-194、miR-382及尿液miR-148b、miR-194、miR-200a的表達與IgA腎病病理損傷程度相關,尿液miR-148b、miR-382
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