利用微衛(wèi)星（SSR）分子標記進行油松無性系種子園及其子代群體結構的研究.pdf

1、本文應用微衛(wèi)星(SSR)分子標記技術對遼寧興城一油松無性系種子園及其自由授粉子代群體的遺傳結構進行了研究，為種子園的營建以及高世代種子園的改建提供理論依據(jù)和技術支撐。主要研究結果如下： 1)以油松總DNA為材料，從其他樹種中應用的101對SSR引物中篩選出擴增條帶清晰、多態(tài)性豐富的SSR引物11對，分析了Taq聚合酶、模板濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度以及引物濃度對SSR-PCR擴增結果的影響，建立了穩(wěn)定的、可重復的油松SSR

2、-PCR最佳反應體系及PCR擴增參數(shù)。研究結果表明：在15μLSSR-PCR反應體系中，模板DNA最適宜濃度為2ng/μL，Mg2+的最適濃度為0.25mmo1·L-1；dNTP最適濃度為0.2mmo1·L-1；單引物的最適濃度均為250μmo1·L-1；Taq聚合酶在15μL反應體系中宜加入0.375U。 2)統(tǒng)計利用所選11對引物對同一油松種子園內49個建園無性系和子代群體進行了SSR-PCR反應，通過6％的變性聚丙稀酰胺凝

3、膠電泳進行檢測，結果表明：每對引物擴增產(chǎn)物在100～250bp之間的等位譜帶數(shù)，最多為10，最少為5，平均為7.7273。 3)建園無性系群體具有較高的遺傳多樣性。建園無性系基因多樣度(PIC)值為0.7435，同其他樹種相比差異顯著，都保持在較高水平。群體的平均觀測雜合度Ho為0.7098，平均期望雜合度He為0.7263，觀測雜合度略微偏低。除PtTX4001實際觀測雜合度低于期望雜合度較多外，其余各位點實際觀測雜合度與期望

4、雜合度均差異不顯著。平均固定指數(shù)(F)值為0.0086，表明親代群體的雜合體和純合體相差不多。Fst值從0.0080(PtTX2146)到0.2527(PtTX4011)，平均值為0.0576，即有5.76％的遺傳變異存在于群體之間，說明遺傳變異主要存在于群體之內(94.24％)。 4)子代群體同種子園無性系(親代)相比，各項多樣性參數(shù)相近，遺傳多樣性只是略微有所降低，仍然保持較寬的遺傳基礎。11個位點中，有一個位點(PR011

5、)觀測雜合度顯著高于期望雜合度，而在余下的10個位點中，除位點PR4.6的觀測雜合度略低于期望雜合度的值外，其余9個位點的觀測雜合度均顯著低于期望雜合度的值。平均觀測雜合度的值(0.5753)也明顯低于平均期望雜合度的值(0.7335)，表明子代群體多數(shù)位點偏離了Hardy-Weingerg遺傳平衡，可能是親代群體在基因世代傳遞過程中遭受到了非隨機因素影響造成的。除位點PR011的Fis值為負值外，其余均為正值，說明子代群體多數(shù)位點純合