編碼人CD20的Ad載體誘發(fā)抗小鼠淋巴瘤特異性免疫的研究.pdf

1、免疫治療在淋巴瘤的治療中占有顯著的地位。利普昔單抗(Rituximab，美羅華)在臨床上的應用顯著地改善了CD20+的B細胞淋巴瘤患者的預后。但美羅華單抗在體內產(chǎn)生的是被動免疫，而在抗腫瘤免疫中，主要還是應以主動性的細胞免疫為主。另有研究表明，用同源異種的腫瘤相關抗原能有效地打破自身腫瘤抗原誘導的免疫耐受。因此，用同源異種的腫瘤抗原修飾樹突狀細胞(Dendriticcells，DC)，誘導機體產(chǎn)生抗腫瘤免疫，從而達到治療腫瘤的目的將是腫

2、瘤治療的一種有效策略。本研究旨在探討編碼人CD20(hCD20)基因的腺病毒載體感染DC作為疫苗免疫小鼠，對CD20<'+>淋巴瘤小鼠的保護作用。 采用RT-PCR的方法將hCD20基因從人外周血中克隆出來并將該基因cDNA片段插入腺病毒穿梭質粒中，采用Ad Max<'TM>腺病毒載體包裝體系，構建Ad5/35hCD20。同時構建穩(wěn)定表達小鼠CD20(mCD20)的B16.F10細胞，模擬CD20陽性的淋巴瘤細胞。用Ad5/35

3、 hCD20感染C57BL/6小鼠骨髓來源的DC<'[1]>，感染劑量為100 pfu/DC，以每只小鼠5×10<'5>DC皮下注射免疫同基因小鼠，每周一次，連續(xù)兩次，并以d1 70-3感染的DCs作為對照，以相同方式免疫小鼠。免疫結束后一周，以mCD20<'+>B16.F10細胞作為靶細胞，免疫后小鼠的脾細胞作為效應細胞，用乳酸脫氫酶釋放法進行體外細胞毒性實驗檢測抗原特異性細胞免疫反應；以同樣的方式兩次DC免疫后一周，皮下接種mCD2

4、0<'+>B16.F10細胞(2×10<'5>細胞/小鼠)建立小鼠淋巴瘤荷瘤模型，觀察Ad5/35 hCD20免疫小鼠后的免疫保護作用。 體外細胞毒實驗結果顯示：Ad5/35 hCD20免疫小鼠能誘導特異性的細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的產(chǎn)生，其CTL殺傷率與效靶比有關，在效靶比為100：1、50：1和25：1情況下，實驗組的殺傷率分別為73.9％±7.6％、57.7％±8.8％和26.7％±3.1％，對照組的殺傷率分別為17.

5、4％±0.8％、12.8％±2.9％和9.1％±1.0％。荷瘤實驗顯示，對照組小鼠在接種mCD20<'+>B16.F10細胞后兩周左右全部成瘤，而實驗組小鼠觀察4周其成瘤率為30％；且實驗組小鼠的腫瘤體積明顯小于對照組。繼續(xù)觀察至2個月，實驗組剩余的小鼠仍無腫瘤生長，提示Ad5/35hCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對CD20+的淋巴瘤小鼠有保護作用。本研究證實，用腺病毒載體介導的同源異種CD20(人CD20)能有效地打破腫瘤免