GX-50對(duì)巨噬細(xì)胞NF-κB抗炎癥通路影響的研究.pdf

1、炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)損傷性傷害的一種防御性反應(yīng)，適度的炎癥有利于激活免疫系統(tǒng)清除病原體，同時(shí)促進(jìn)組織愈合。但若炎癥反應(yīng)過(guò)度，產(chǎn)生級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，將導(dǎo)致更嚴(yán)重的自身?yè)p傷，從而增加多種疾病的發(fā)病率和死亡率。以往的研究大多從體液因素的角度出發(fā)來(lái)尋找抗炎癥藥物，而膽堿能抗炎癥通路的提出為抗炎癥研究提供了新的方向。與體液抗炎癥通路相比，膽堿能抗炎癥通路具有器官保護(hù)以及對(duì)抗過(guò)度炎癥和免疫反應(yīng)的特性，起效快并且作用廣泛。但是，目前常用的a7nAChR激動(dòng)劑

2、，如尼古丁，卡巴膽堿和煙堿等，雖然可以降低炎癥，但均有一定的毒性，會(huì)對(duì)血壓，呼吸，心率有一定的抑制作用，這大大限制了其臨床運(yùn)用。因而開(kāi)發(fā)低毒性的a7nAChR激動(dòng)劑對(duì)于膽堿能抗炎癥機(jī)制運(yùn)用于臨床治療的研究具有重要意義。
　　研究目的：
　　GX-50是從花椒中提取的一種有效成分，通過(guò)藥物軟件分析發(fā)現(xiàn)其是一種潛在的α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑。我們的前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GX-50能夠和大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞表面的α7煙堿型乙酰膽堿受體結(jié)

3、合,有效抑制 Aβ誘導(dǎo)的皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。本研究目的是探討GX-50對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞炎癥因子的影響以及其在NF-κB炎癥通路上的作用。
　　研究方法：
　　選用不同濃度的GX-50處理小鼠巨噬細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)其對(duì)于細(xì)胞活性的影響并選擇合適的加藥濃度。然后，通過(guò) ELISA法和real time PCR法測(cè)定GX-50對(duì)于LPS誘導(dǎo)的IL-1β和TNF-α這兩種炎癥因子的影響。再通過(guò)EMSA來(lái)檢測(cè)GX-50對(duì)于細(xì)

4、胞核內(nèi)NF-κB的量的影響。最后通過(guò)western blot來(lái)探索GX-50在NF-κB炎癥通路上的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　MTT檢測(cè)的結(jié)果顯示1×10-8～10-4M的GX-50對(duì)巨噬細(xì)胞的活性沒(méi)有顯著影響，從中選擇了10-6M作為之后GX-50的加藥濃度。在用GX-50預(yù)處理細(xì)胞1h，然后再加入LPS處理細(xì)胞4h后，發(fā)現(xiàn)GX-50抑制了LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中IL-1β和TNF-α這兩種炎性因子的分泌，并且其對(duì)應(yīng)的基因