青枯雷爾氏菌噬菌體的分離鑒定及應(yīng)用研究.pdf

1、由青枯雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染煙草引起的煙草青枯病是煙草主要病害之一，生產(chǎn)上尚無(wú)有效的防治手段。本研究從生物防治的角度出發(fā)，自煙草青枯病病圃中健康煙株的根際土壤中分離得到一株噬菌體，通過(guò)病毒形態(tài)學(xué)，常規(guī)生物學(xué)測(cè)定和分子生物學(xué)測(cè)序技術(shù)，確定了該噬菌體的分類地位。利用盆栽試驗(yàn)測(cè)定了該噬菌體對(duì)煙草青枯病的防效，利用土壤細(xì)菌宏基因組學(xué)，測(cè)定了該噬菌體對(duì)土壤細(xì)菌微生物種群多樣性的影響。具體結(jié)果如下:
　　

2、1.分離并純化出一株裂解性R.solanacearum噬菌體，命名為∈RS-1，噬菌斑為圓形，清晰透明，邊緣光滑，直徑1mm～2mm，噬菌體形態(tài)為蝌蚪狀，頭部為二十面體的立體對(duì)稱，直徑大約為94nm，并有一帶伸縮尾鞘的長(zhǎng)尾大約為27nm×100nm;噬菌體濃縮液經(jīng)SDS-PAGE分析至少可以觀察到25條蛋白條帶，說(shuō)明其蛋白外殼至少含有25個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白。
　　2.分子生物學(xué)測(cè)序結(jié)果顯示，噬菌體∈RS-1與Ralstonia phage

3、 RS603(AB937974.1)具有很高的同源性，初步分析它們都是屬于有尾噬菌體目（Caudovirales），肌尾噬菌體科（Myoviridae），P2噬菌體屬（P2-like viruses）的Ralstonia phage。
　　3.生物學(xué)特性的測(cè)定顯示:噬菌體∈RS-1對(duì)R.solanacearum的最佳感染復(fù)數(shù)為0.01;其吸附和感染R.solanacearum時(shí)的潛伏期約為30 min，爆發(fā)期約為80 min，裂解

4、量約為156;噬菌體∈RS-1原液在4℃長(zhǎng)期保存時(shí)活性保持的最好;其裂解活性在28℃時(shí)最高，在28℃～50℃之間均較強(qiáng)，但在溫度超過(guò)60℃后活性基本喪失;其對(duì)酸堿的耐受力較強(qiáng)，在pH值為3～8的范圍內(nèi)均有較強(qiáng)的裂解活性，當(dāng)pH值超過(guò)9后活性開(kāi)始降低;其對(duì)紫外線有一定的耐受能力，經(jīng)紫外線照射0 min～9 min后裂解活性依然較強(qiáng)，12 min后活性開(kāi)始下降，21 min后活性基本喪失;其對(duì)氯仿不敏感，5％濃度的氯仿對(duì)其活性基本沒(méi)有影響。

5、
　　4.利用盆栽試驗(yàn)，對(duì)噬菌體∈RS-1防治煙草青枯病進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，提前利用噬菌體∈RS-1對(duì)煙株進(jìn)行灌根和浸根處理，對(duì)煙草青枯病的發(fā)生都有顯著的控制作用，尤其是進(jìn)行預(yù)前灌根時(shí)，可有效抑制煙草青枯病發(fā)生，相對(duì)防效達(dá)到94.87％。
　　5.利用土壤細(xì)菌宏基因組學(xué)方法，對(duì)添加和未添加噬菌體∈RS-1的土壤中的菌群落多樣性進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未添加噬菌體∈RS-1的土壤細(xì)菌種群多樣性相比，人為添加噬菌體∈RS-1對(duì)