耐鹽基因BADH和CMO轉化玉米的研究.pdf

1、本文采用玉米常用自交系的幼胚為受體材料，對耐鹽堿基因的遺傳轉化進行了研究，為培育出高度耐鹽堿的玉米新品種打下良好基礎；并在此基礎上進行了玉米愈傷組織及苗耐鹽堿性敏感性研究，確定玉米愈傷組織及幼苗在含鹽培養(yǎng)基上臨界濃度，對已轉化的愈傷組織及幼苗進行篩選和幾項重要生理指標的鑒定。評價轉BADH和CMO基因玉米耐鹽堿的能力。取得的主要研究結果如下： 一、玉米遺傳轉化方法研究1.玉米耐鹽基因的農(nóng)桿菌轉化的研究本試驗中用于轉化的抗鹽堿基因

2、為膽堿單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)。以普通玉米自交系H99和7922的胚性愈傷組織為材料，通過愈傷組織對堿性鹽的敏感性實驗，確定愈傷組織適宜選擇壓。利用農(nóng)桿菌介導法將抗鹽基因導入玉米自交系中，研究農(nóng)桿菌轉化系統(tǒng)的優(yōu)化，探討不同的侵染時間、不同的菌液的濃度等條件對轉化效果的影響。 2.玉米耐鹽基因花粉管通道法轉化研究本實驗還采用了花粉管通道法對玉米自交系進行遺傳轉化。將抗鹽基因轉入玉米自交系5003、春0

3、9、7922中，同時探討了不同導入時間、不同DNA的濃度、不同的導入量等對其轉化率的影響，并從中得出花粉管通道法的最佳轉化條件。用SSC溶解的質粒，導入的最佳時間在早上6：00-8：30時、下午4：00-7：00時，導入間隔時間要在8-20小時范圍內(nèi)，并且導入質粒的濃度為500μg/mL、導入量為200μl即可達到較高的轉化率，通過轉化植株后代的PCR-Southern雜交分析，證明了抗鹽基因已整合到受體植株的基因組中，并在后代中得以表

4、現(xiàn)。 二、玉米愈傷組織及幼苗有關耐鹽堿性生理指標的測定所測的耐鹽性生理指標為細胞膜透性、游離脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及過氧化物酶活性。 把玉米愈傷組織在不同鹽濃度下繼代培養(yǎng)，定期每5天測取這五項指標，對玉米幼苗進行澆鹽水處理，對不同濃度鹽水條件下，定期每5天測取這五項生理指標。得到關于玉米愈傷組織及幼苗在不同鹽濃度條件下不同時期的發(fā)育規(guī)律，膜透性脯氨酸含量和丙二醛含量隨著鹽脅迫的增強在增加，且都高于無