莪術油誘導卵巢癌上皮細胞系調亡及其對STAT信號傳導通路的影響.pdf

1、目的:卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率據(jù)婦科惡性腫瘤之首。由于其起病隱匿且缺乏早期診斷手段，大多數(shù)患者初次就診時已發(fā)展為卵巢癌晚期，甚至廣泛轉移，手術已不能完全去除，目前，腫瘤細胞減滅術及術后聯(lián)合化療是目前公認的治療方法。以順鉑為基礎的化療是治療卵巢癌的常用藥物，但在治療過程中約80％患者表現(xiàn)出不同程度的獲得性耐藥，嚴重影響患者的預后[1-2]。因此，如何利用新的敏感的藥物設計出抗腫瘤活性最佳，而毒性及耐藥性最小的聯(lián)合

2、化療方案，進而提高卵巢癌患者的生存率和生活質量，是我們深入研究的重點。
　　 莪術油是從姜科植物莪術的干燥根莖中提取的揮發(fā)油成分。莪術中富含揮發(fā)油，且成分相當復雜，主要化學成分為β-欖香烯、莪術醇、莪術酮、新莪術二酮、樟腦等[3]。其具有很好的抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗血栓形成和調節(jié)免疫功能等[4-6]廣泛的生物學效應，尤其是其抗腫瘤作用受到廣泛關注。有研究證實，莪術油對胃癌，肝癌，宮頸癌，子宮內膜癌細胞等有抑制作用，但莪術油對化

3、療耐藥的卵巢癌是否有作用目前尚未見報道。研究認為STAT3信號傳導通路及其調控的下游靶基因可以作為腫瘤對化療耐藥的標志[7-9]。
　　 本實驗擬通過體外實驗將莪術油作用于人卵巢癌上皮細胞SKOV3和卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP觀察其對細胞增殖的影響，是否可逆轉卵巢癌順鉑耐藥細胞對順鉑的耐藥性，并初步探討其對STAT信號傳導通路的影響，為耐藥性卵巢癌的臨床治療提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法:(1)細胞培養(yǎng):體

4、外培養(yǎng)人卵巢癌上皮細胞SKOV3和卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP24小時后，加入不同濃度的莪術油，采用細胞形態(tài)學觀察、HE染色法觀察細胞形態(tài)學變化。(2)分別加用16、32、64、128、256ug/ml莪術油作用于卵巢癌細胞SKOV3和SKOV3/DDP，同時設立空白對照組，培養(yǎng)24，48小時后，利用噻唑藍比色法(MTT)法檢測不同濃度莪術油對細胞SKOV3及SKOV3/DDP增殖抑制情況。(3)順鉑，莪術油及其聯(lián)合應用于SK

5、OV3/DDP24小時，利用免疫組織化學法檢測細胞信號通路中STAT3及Survivin、Caspase-3、VEGFCmRNA蛋白的表達變化情況。(4)半定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法測定STAT3及其轉錄激活因子Survivin、VEGFC和Caspase-3的表達情況。
　　 結果:(1)倒置顯微鏡及HE染色觀察細胞形態(tài)學變化:對照組生長旺盛，形狀規(guī)則，呈梭形;加藥組見胞數(shù)量明顯減少，細胞間隙變大，細胞體積脹大

6、，顆粒增多，包膜不清。(2)不同濃度莪術油對卵巢癌細胞SKOV3和SKOV3/DDP細胞增殖的影響:隨著藥物濃度和作用時間的增加，抑制率明顯增高，具有明顯的劑量-時間效應關系，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。(3)免疫組化法檢測莪術油作用于SKOV3/DDP細胞24h后相關基因表達變化情況:STAT3、Survivin、VEGFC表達下調、Caspase-3表達增高(4)RT-PCR測定顯示:順鉑，莪術油及其聯(lián)合應用順鉑作用于卵巢癌細

7、胞后STAT3、Survivin、VEGFC吸光度比值下降，Caspase-3吸光度值增高（P＜0.05）。
　　 結論:(1)莪術油對卵巢癌細胞SKOV3，SKOV3/DDP有明顯的增殖抑制作用;(2)莪術油聯(lián)合順鉑可以協(xié)同誘導SKOV3/DDP凋亡，在凋亡發(fā)生過程中可能通過下調STAT3，Survivin，VEGFC的表達，上調凋亡相關基因Caspase-3蛋白的表達發(fā)揮作用。(3)STAT3、Survivin蛋白表達水平與