鴉膽子油乳體外對人結(jié)直腸腺癌細胞(HCT15)增殖和凋亡及PTEN、Bcl-2表達的影響.pdf

1、目的:
　　鴉膽子油乳是以鴉膽子仁石油醚提取物為原料,以精致大豆磷脂為乳化劑制成的水包油型乳劑。對多種腫瘤有良好的療效,其可能的作用機制為:選擇性破壞腫瘤的細胞膜和線粒體;抑制癌細胞生長和DNA合成,阻斷癌細胞的細胞周期;升白細胞作用;提高機體免疫力;對多種藥物的耐藥有逆轉(zhuǎn)作用等。本實驗以鴉膽子油乳為實驗對象,研究鴉膽子油乳體外抑制人結(jié)直腸腺癌細胞(HCT15)增殖和凋亡的影響,探討PTEN、Bcl-2表達的變化。為鴉膽子油乳用于

2、結(jié)直腸癌治療提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)HCT15細胞。
　　2.取對數(shù)生長期細胞至96孔細胞培養(yǎng)板中。
　　3.加入三種不同濃度的鴉膽子油乳48小時后,用顯微鏡觀察細胞生長情況。
　　4.用CCK8試劑檢測不同濃度的鴉膽子油乳酶標儀測定在450nm處的吸光度。
　　5.提取HCT15細胞RNA以及加了鴉膽子油乳的HCT15細胞RNA,然后進行RT-PCR實驗,檢測促凋亡基因PTEN以及凋

3、亡抑制基因Bcl-2表達水平的變化。
　　6.用流式細胞儀以FL3通道檢測,結(jié)果通過Modfit軟件進行分析,觀察鴉膽子油乳對人結(jié)腸腺癌細胞(HCT15)細胞周期的影響。
　　結(jié)果:
　　1.CCK8法顯示三組濃度鴉膽子油乳(10ug/ml,20ug/ml,40ug/ml)對人結(jié)直腸腺癌細胞(HCT15)作用48小時后,有明顯的抑制作用,存在量效關(guān)系。
　　2.取鴉膽子油乳組細胞及未加藥組細胞進行RT-PCR實驗

4、顯示:在鴉膽子油乳作用下,PTEN基因的表達升高,Bcl-2基因的表達水平降低,在mRNA水平證明鴉膽子油乳可促使細胞凋亡發(fā)生,抑制了HCT15細胞的增殖。
　　3.用流式細胞儀檢測鴉膽子油乳對HCT15細胞周期的影響,實驗結(jié)果表明:加入鴉膽子油乳大量細胞阻滯在S期,無法順利完成細胞周期。
　　結(jié)論:
　　1.鴉膽子油乳體外抑制人結(jié)直腸腺癌細胞增殖,能阻滯細胞DNA的合成,可誘導(dǎo)細胞凋亡。
　　2.凋亡過程中檢測